Stabilnost izmenjave DNA v tekočih kulturah in v biofilmih bakterije Bacillus subtilisRuperčič, Maja (Avtor) Mandić Mulec, Ines (Mentor) Dragoš, Anna Magdalena (Komentor) BiotehnologijaBacillus subtiliskompetencabiofilmplanktonska kulturaBacillus subtilis je naravno kompetentna bakterija, ki je sposobna tvoriti biofilm. Zadnje raziskave kažejo, da je horizontalni genski prenos znotraj statične kulture uspešnejši, kot v planktonski kulturi. V magistrskem delu smo kvantificirali izmenjavo DNA v statični (biofilmu) in planktonski (tekoči) kokulturi sevov B. subtilis, sev A odporen proti antibiotiku spektinomicinu (A(spec)) in sev B proti antibiotiku kloramfenikolu (B(cat)). Sposobnost sprejema DNA, rast, morfologija in biomasa biofilma obeh sevov je bila primerljiva. Ugotovili smo, da se v kokulturi sevov A(spec) in B(cat), ki ju gojimo v tekočem gojišču MSgg, transformante pojavijo že po 4 urah inkubacije, vendar je frekvenca transformacije nizka. Frekvenca transformacije statične in stresane kulture je bila signifikantno različna (p=0,002). Izmenjava DNA je bila višja v statični kot v stresani kulturi po 12-ih in 24-urah inkubacije (p12 ur=0,113; p24 ur =0,013). Poleg tega smo merili tudi izražanje kompetenčnih genov v gojišču MSgg pri sevu B. subtilis PS-216 wtGFP (amyE::RFP comGA-gfp), ki konstitutivno izraža RFP ter GFP pod kontrolo promotorja operona comGA. Ugotovili smo, da kulturi dosežeta maksimum izražanja comGA-gfp po šestih urah inkubacije. Ob dodatku DNAze v gojišče smo pokazali, da ta ne vpliva na izmerjeno koncetracijo eDNA v kokulturi. Čeprav je bila izmenjava DNA med sevi višja v statični kulturi, pa naši rezultati kažejo, da izmenjava poteče verjetno še preden celice tvorijo biofilm in zato na podlagi naših rezultatov ne moremo zaključiti, da je izmenjava DNA pri B. subtilis učinkovitejša v biofilmu.[M. Ruperčič]20172017-06-03 07:15:16Magistrsko delo/naloga92403sl