Izražanje nekaterih genov, vpletenih v transport kalija in natrija glive Aureobasidium pullulans, v kvasovki Saccharomyces cerevisiaeMarkuš, Tadej (Avtor) Gunde Cimerman, Nina (Mentor) Zajc, Janja (Komentor) glivehalotolerantne gliveAureobasidium pullulanstransformacija homologna rekombinacijakloniranje genovACU1ACU2HAKNHAmolekularne tehnikeanaliza proteinskih zaporedijIz genske knjižnice poliekstremotolerantne črne kvasovke A. pullulans smo izbrali 4 različne gene – ACU1, ACU2, HAK in NHA, ki smo jih klonirali v celice S. cerevisiae s homologno rekombinacijo. Kot vektor smo uporabili plazmid pBEVY-U, ki ima kot selekcijski marker gen URA3. Plazmid smo imeli pomnožen v dveh delih, ki sta se prekrivala v selekcijskem markerju. Ob uspešni transformaciji so se fragmenti znotraj celice sestavili in selekcijski marker se je lahko izražal. Uspešne transformante smo nadaljnje testirali na gojiščih z različnimi stresnimi dejavniki. Rezultati so pokazali, da ATPaza P-tipa Acu1 omogoči rast pri visoki koncentraciji K+, črpalka Acu2 pa omogoči transformiranim celicam rast na gojiščih brez K+ ionov. Antiporterji Nha so transformiranim celicam omogočili rast na gojišču, ki je vsebovalo NaCl v koncentraciji 2 mol/L in transporterji Hak so izboljšali rast transformant na gojiščih s povišanimi koncentracijami glicerola (25 %) in LiCl (590 mM). Izvedli smo tudi in silico analize proteinskih zaporedij in rezultate primerjali z rezultati podobnih proteinov, ki smo jih dobili v bazah podatkov preko spleta.[T. Markuš]20172017-04-05 10:41:26Magistrsko delo/naloga91421sl