Optimizacija in aplikacija metode za mikroskopsko kvantifikacijo morfoloških značilnosti bakterij iz rodu Streptomyces.Slakan, Ana (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Štern, Alja (Komentor) morfologijafilamentozne bakterijeStreptomyces clavuligerusvzpostavitev metodemikroskopska kvantifikacijaslikovna analizaklavulanska kislinaBakterije iz rodu Streptomyces odlikuje izreden biosintezni potencial. Njihova morfologija naj bi bila tesno povezana s proizvodnjo sekundarnih metabolitov. Vzpostavili in optimizirali smo metodo priprave mikroskopskih preparatov iz zelo kompleksnih brozg bioprocesov s postopkom barvanja s kristal vijoličnim. V naslednji fazi smo razvili postopek digitalne slikovne analize morfoloških parametrov ter ga aplicirali na spremljanje morfologije Streptomyces clavuligerus pri proizvodnji klavulanske kisline. Pri tem smo pokazali, da se med rastjo in razvojem bakterije Streptomyces clavuligerus v laboratorijskih gojitvenih steklenicah pri nekaterih pogojih lahko pojavlja peletasta rast in lahko prihaja do procesov diferenciacije micelija. Rezultati kažejo tudi, da se v tekočih gojiščih na pilotnem nivoju pri iztrošenih kulturah Streptomyces clavuligerus pojavljajo sporam podobne strukture. Oboje nakazuje na to, da bi lahko bil razvojni cikel streptomicet v tekočih gojiščih bolj podoben razvojnemu ciklu na trdnih gojiščih, kot se trenutno domneva. Analiza različnih morfoloških parametrov kot so dolžina, debelina hif, razvejanost ter viabilnost micelija je omogočila ovrednotenje razlik med bioprocesi na pilotnem in na industrijskem nivoju. V standardnem pilotnem bioreaktorju smo tako opazovali razvoj bistveno krajših hif v primerjavi s pilotnim bioreaktorjem, ki je po geometriji in konfiguraciji mešal podoben industrijskemu. V bioreaktorju na industrijskem nivoju so bile hife še krajše, manj razvejane, vendar bistveno debelejše in viabilnejše od obeh pilotnih bioreaktorjev. Rezultati sicer kažejo, da je morfologija do določene mere povezana s produkcijo klavulanske kisline, vendar bi za potrditev potrebovali bistveno večjo količino podatkov. Vzpostavljena metoda ima pri spremljanju morfologije streptomicet izreden pomen in je primerna za rutinsko uporabo v industriji.[A. Slakan]20172017-03-29 07:15:07Magistrsko delo/naloga91359sl