OKREVANJE IN PREŽIVETJE CELIC PO ELEKTROPORACIJI V MEDIJU Z NIŽJIM pHBREZOVAR, JERNEJ (Avtor) Maček Lebar, Alenka (Mentor) elektroporacijarakave celiceB16F1pHkisel celični medijcelično preživetjepretočna citometrijaKer se v praksi določena rakava obolenja zdravi z elektrokemoterapijo, kjer gre za lokalni vnos zdravil v rakava tkiva z uporabo elektroporacije, smo v diplomskem delu raziskovali vpliv znižanega pH medija na preživetje ter elektroporacijo rakavih celic B16F1 in vitro. Mediju smo spreminjali pH z dodajanjem ocetne kisline in izvedli preizkuse preživetja celic v medijih s pH 8,1 (običajen medij brez ocetne kisline), 7,45, 6,87, 6,47, 5,95 in 5,33. Celice so bile tem medijem izpostavljene 24 ur. Izkazalo se ja, da so mediji s pH manjšim od 6 neugodni za celično preživetje. V nadaljevanju smo raziskovali kakšen vpliv ima kisel medij (pH 6,72) na elektroporacijo in okrevanje celice. Elektroporacijo smo izvajali z 8 pravokotnimi napetostnimi pulzi (180 V (120 V/mm), 270 V (180 V/mm), 360 V (240 V/mm) in 450 V (300 V/mm)), dolžine 100 µs in frekvenco 1 Hz. Izvedli smo 4 kombinacije eksperimentov, kjer smo celice elektroporirali v običajnem ali kislem mediju, ter jih za 10 minut pustili v običajnem ali kislem mediju, kjer so okrevale. Po 24 urah smo izvedli test preživetja. Rezultati eksperimentov so pokazali, da kisel medij ugodno vpliva na proces elektroporacije in okrevanja, saj dosežemo enak delež živih celic pri elektroporaciji z višjimi napetostmi kot pri uporabi običajnega medija. Z enakimi kombinacijami medijev smo preverili vnos propidijevega jodida v celice med elektroporacijo in v obdobju okrevanja. Prisotnost propidijevega jodida smo določili s pretočno citometrijo. Če uporabimo za elektroporacijo in okrevanje celic kisel medij, potrebujemo višje napetosti, da dosežemo enak delež celic s propidijevim jodidom, kot pri uporabi običajnega medija.20162016-09-14 08:00:01Diplomsko delo85144sl