Vrednotenje substituiranih psoralenov kot zaviralcev LMP7 podenote imunoprotesomaRančnik, Pia (Avtor) Gobec, Stanislav (Mentor) Gobec, Martina (Komentor) proteasom proteini zaviralci imunoproteasoma psoralen sintezni postopkiProteasom je multikatalitični kompleks, ki homeostazo celice vzdržuje preko odstranjevanja nepravilno zvitih in poškodovanih proteinov ter drugih signalnih molekul, ki nastanejo tekom različnih celičnih procesov. Preoteasom obstaja v več oblikah, a sta med pomembnejšimi standardni in imunoproteasom. Slednji ima pomembno vlogo predvsem v oblikovanju imunskega odziva. Povezujejo ga s številnimi patološkimi stanji (avtoimunskimi, rakavimi in nevrodegenerativnimi obolenji), zato s svojimi katalitičnimi podenotami (MECL-1, LMP2 in LMP7) predstavlja vedno bolj zanimivo farmakološko tarčo. Tekom magistrske naloge smo izvedli 5-stopenjsko sintezo potencialnega zaviralca LMP7 podenote i-proteasoma ter ga skupaj s še 47 drugimi, predhodno sintetiziranimi analogi psoralenskega skeleta biokemijsko ovrednotili. Najprej smo s Pechmannovo kondenzacijo med rezorcinolom in dietil-2-acetilsukcinatom sintetizirali osnovni kumarinski skelet. Nato smo na mestu 7-kumarinskega skeleta hidroksilni skupini z reakcijo nukleofilne substitucije pripeli 2-bromoacetofenon in dobili predhodnico psoralenskega skeleta, katero smo z reakcijo kondenzacije in posledično ciklizacijo pretvorili do slednjega. V zadnjih dveh stopnjah smo aktivirano karboksilno skupino pretvorili v amidno skupino, kamor smo vezali klorokarbonilsulfenil klorid in dobili končno spojino z 1,3,4-oksatiazol-2-onom kot elektrofilom. V sklopu biokemijskega vrednotenja smo sprva pri 10 μM koncentracijah spojin določili rezidualno aktivnost LMP7 katalitične podenote i-proteasoma. Na podlagi rezidualne aktivnosti smo izbrali 8 spojin z najmočnejšimi zaviralnimi lastnostmi in jih podrobneje ovrednotili s parametroma encimske kinetike Ki in IC50. Za vse spojine so bile vrednosti v nizko mikormolarnem območju. Ugotovili smo, da je za zaviralno aktivnost i-proteasoma v terminalnem delu psoralenskega skeleta pomemben sukcimidni ester ali oksatiazolon za ireverzibilne zaviralce in karboksilna skupina za reverzibilne, čeprav slednja ni izkazala močnejših zaviralnih sposobnosti. Med funkcionalnih skupinami na furanskem obroču psoralenskega skeleta so najmočneje zavirale aromatske spojine in sicer spojine, ki imajo 2,5-dimetiltiofenski, furanski in nesubstituiran benzenov obroč. Dobljeni podatki RANČNIK, Pia: Vrednotenje substituiranih psoralenov kot zaviralcev LMP7 podenote imunoproteasoma. predstavljajo dobro osnovo za nadaljnje načrtovanje in sintezo zaviralcev LMP7 podenote i-proteasoma, ki bodo imeli izboljšane zaviralne lastnosti.[P. Rančnik]20162016-04-08 18:42:12Magistrsko delo/naloga81508sl