Delna karakterizacija metabolita bakterije Clostridium sporogenes s sposobnostjo inaktivacije toksinov bakterije Clostridioides difficileKristovič, Nika (Avtor) Rupnik, Maja (Mentor) Mahnič, Aleksander (Komentor) Clostridium sporogenesClostridioides difficileELISAsupernatanttoksinOpazovali smo aktivnost supernatanta bakterije Clostridium sporogenes, ki inaktivira toksina TcdA in TcdB bakterije Clostridioides difficile, z namenom ovrednotenja lastnosti efektorske snovi in osnovnih fizikalno-kemijskih lastnosti. Zaviralno aktivnost smo ovrednotili z merjenjem relativne koncentracije toksinov z metodo ELISA. Supernatant bakterije C. sporogenes smo obdelali s toplotno denaturacijo (99 °C, 1 h), spremembo pH, dodatkom EDTA ter masno filtracijo z mejami 30 kDa in 3 kDa. Toplotna obdelava supernatanta je povzročila popolno izgubo zaviralnega učinka, medtem ko je netretiran supernatant povzročil statistično značilno znižanje relativne koncentracije TcdA/TcdB v dveh neodvisnih eksperimentih (p = 0,014 in p = 0,047), kar kaže na toplotno labilnost efektorske snovi. Membranska separacija je pokazala, da zaviralna aktivnost ostane ohranjena tudi po odstranitvi molekul z maso večjo od 30 kDa in 3 kDa (v obeh primerih p = 0,0035), medtem ko filtracija kontrolnega medija WCAB ni imela značilnega vpliva na izmerjeni signal (p = 0,14). Na podlagi teh rezultatov sklepamo, da je efektorska snov zelo majhna molekula z molekulsko maso manjšo od 3 kDa, najverjetneje peptidne narave. Poskusi z dodatkom EDTA in spremembo pH niso omogočili zanesljivih zaključkov o vključenosti kovinskih ionov ali pH-optimumu aktivnosti zaradi izrazite interference z ELISA-metodo.[N. Kristovič]20262026-09-16 07:17:14Magistrsko delo/naloga187875sl