Vzpostavitev inducibilnega celičnega modela utišanja gena DHCR24 iz sinteze holesterola v jetrnih celicahPajnič, Neja (Avtor) Skubic, Cene (Mentor) sinteza holesterolaDHCR24shRNAlentivirusicelične linijeEncim DHCR24 (24-dehidroholesterol reduktaza) deluje v Blochovi sintezni poti holesterola in lahko reducira več različnih sterolnih intermediatov. Encim reducira dvojno vez, ki jo imajo vsi intermediati na mestu C24, s čimer nastanejo bolj nasičeni steroli, vključno s končnim produktom holesterolom. Motnje v delovanju DHCR24 povzročijo kopičenje sterolov, ki vpliva na celične procese. V okviru diplomske naloge smo želeli vzpostaviti inducibilen lentivirusni shRNA-sistem za specifično in časovno nadzorovano utišanje DHCR24 v jetrnih celičnih linijah ter s pomočjo LC-MS/MS kvantitativno določiti spremembe v sterolnem profilu. Konstrukt za shRNA proti DHCR24 smo z lentivirusnimi delci vnesli v tri različne jetrne celice (HepG2, Huh7 in Snu449). Po integraciji v genom se zapis za shRNA ohrani tudi po delitvi celic. Inducibilni shRNA-sistem (pod nadzorom IPTG‑inducibilnega promotorja) omogoča vklop ali izklop utišanja genov. To je pri DHCR24 ključno, saj njegova popolna odstranitev zavre rast in preživetje celic. Po ekstrakciji in kvantifikaciji sterolov z LC-MS/MS, smo dokazali utišanje DHCR24 v celični liniji Snu449 MOI5, ki ni bila tretirana z antibiotikom.20262026-09-09 10:40:01Diplomsko delo/naloga187179sl