Izolacija in biokemijska karakterizacija paraloga proteina Vaa-snaclec-3/2 iz strupa modrasa (Vipera ammodytes ammodytes)Snedec, Andraž (Avtor) Križaj, Igor (Mentor) kačji strupVipera ammodytes ammodyteslektinu tipa C podobni proteiniQSPRModras (Vipera ammodytes ammodytes) je najbolj strupena in medicinsko najbolj pomembna evropska kača. Velik delež njegovega strupa predstavljajo lektinu tipa C podobni proteini (snacleci), ki z vezavo na trombocitne receptorje in plazemske proteine vplivajo na hemostazo. Vaa snaclec-3/2 je najbolje raziskan snaclec iz modrasovega strupa. Zaradi reverzibilne trombocitopenije, ki jo inducira po vezavi na trombocitni receptor GPIb, je Vaa-sanclec-3/2 zanimiva molekula za razvoj bolj varnih antikoagulantnih zdravil. Poleg Vaa-sanclec-3/2 je bilo v strupu modrasa identificiranih še pet drugih snaclecov s še neznano funkcijo. Štirje med njimi zaradi nizke zastopanosti v strupu in podobnih fizikalno kemijskih lastnosti še niso bili izolirani v homogeni obliki. Cilj diplomske naloge je bil iz modrasovega strupa izolirati vsaj enega od teh. Kompleksno zmes proteinov v modrasovem strupu smo najprej ločili po velikosti z gelsko filtracijo. Za nadaljnje čiščenje tarčnih snaclecov smo uporabili ionsko-izmenjevalno kromatografijo. Preizkusili smo različne pogoje ločevanja s kationsko- in anionsko izmenjevalno kromatografijo, a pogojev za uspešno ločbo nismo uspeli najti. S kationsko-izmenjevalno kromatografijo pri pH 4,5 pa smo od molekul snaclec vendarle uspeli odstraniti večino drugih komponent strupa, kar predstavlja obetavno izhodišče tako za pripravo homogenih izooblik Vaa-snaclec, kot za pripravo nekaterih drugih komponent strupa, ki še niso označene. V diplomskem delu smo uporabili tudi javno dostopen program za kvantitativno modeliranje povezave med strukturo in lastnostmi spojine (QSPR; ang. Quantitative Structure-Property Relationship), ki temelji na strojnem učenju. Z njegovo pomočjo smo napovedali elucijske profile Vaa-snaclecov pri kationsko-izmenjevalni kromatografiji v odvisnosti od pH mobilne faze. Napovedi so bile podobne nekaterim empiričnim rezultatom. Določili smo vrednost parametra, pri katerem naj bi se Vaa snacleci ločili med seboj, žal pa je bil čas, ki je bil na razpolago za izvedbo diplomskega dela, prekratek, da bi teoretično napoved preizkusili tudi v praksi.20262026-09-07 11:00:01Diplomsko delo/naloga186925sl