<?xml version="1.0"?>
<rdf:RDF xmlns:rdf="http://www.w3.org/1999/02/22-rdf-syntax-ns#" xmlns:dc="http://purl.org/dc/elements/1.1/"><rdf:Description rdf:about="https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?id=186729"><dc:title>Priprava sesalskih vektorjev z zapisi za karioferine alfa in beta in preverjanje interakcij KPNA4, 5 in 6 s podenoto fenilalanil-tRNA-sintetaze A</dc:title><dc:creator>Šinkovec,	Jedrt	(Avtor)
	</dc:creator><dc:creator>Župunski,	Vera	(Mentor)
	</dc:creator><dc:subject>fenilalanil-tRNA-sintetaza</dc:subject><dc:subject>karioferini</dc:subject><dc:subject>transportin</dc:subject><dc:subject>test »pull-down« z GST</dc:subject><dc:subject>imunodetekcija</dc:subject><dc:description>Človeška citosolna fenilalanil-tRNA-sintetaza (FARS) je encim, ki katalizira aminoacilacijo fenilalanil-tRNA in ima ključno vlogo pri translaciji. Poleg aminoacilacije so bile v preteklih letih opisane tudi njene nekanonične funkcije, med drugim so podenoti FARSA in FARSB zaznali v celičnem jedru. Mehanizmi njunega jedrnega transporta ostajajo slabo raziskani, zato je bil namen diplomskega dela pripraviti sesalske ekspresijske vektorje z zapisi za karioferine α (KPNA1–KPNA7), karioferin β1 (KPNB1) in transportin 1 (TNPO1) ter preveriti morebitne interakcije med podenotama FARS in jedrnimi transportnimi receptorji s testom »pull-down« z GST.
Zapise za karioferine smo uspešno prestavili iz bakterijskega ekspresijskega vektorja pGEX2TK v sesalski ekspresijski vektor pcDNA3.1 z metodo IVA. Uspešnost priprave konstruktov smo potrdili z restrikcijsko analizo, s PCR in z določanjem nukleotidnega zaporedja. V bakterijskem ekspresijskem sistemu smo izrazili in nato izolirali rekombinantna proteina GST-FARSA in GST-FARSB. Lastnosti izoliranih proteinov smo ovrednotili z metodama dinamičnega sipanja svetlobe (DLS) in diferenčne dinamične fluorimetrije v nano območju (nanoDSF). Rezultati DLS so potrdili prisotnost proteinskih agregatov rekombinantnih proteinov.
S testom »pull-down« z GST smo preverili interakcije rekombinantnega proteina GST-FARSA s karioferini KPNA4, KPNA5 in KPNA6. V izvedenih eksperimentih nismo nedvoumno dokazali specifičnosti interakcij med analiziranimi proteini. Hipoteze o jedrnem transportu FARS prek preučevanih karioferinov na podlagi dobljenih rezultatov zato ni bilo mogoče potrditi. Kljub temu smo uspešno pripravili nabor sesalskih ekspresijskih konstruktov, kar predstavlja pomembno osnovo za nadaljnje raziskave jedrnega transporta FARS in njenih potencialnih nekanoničnih funkcij.</dc:description><dc:date>2026</dc:date><dc:date>2026-09-04 10:50:01</dc:date><dc:type>Diplomsko delo/naloga</dc:type><dc:identifier>186729</dc:identifier><dc:language>sl</dc:language></rdf:Description></rdf:RDF>