Protein CRYM kot znotrajcelični regulator ščitničnih hormonov: priprava in karakterizacija rekombinantnega proteinaVozelj, Hana (Avtor) Taler-Verčič, Ajda (Mentor) CRYMščitnični hormoniNi-afinitetna kromatografijatermična stabilnostDLSŠčitnica je endokrina žleza, v kateri se sintetizirajo ščitnični hormoni, ki delujejo kot regulatorji celičnega metabolizma, rasti in razvoja. μ-kristalin (CRYM) je citosolni protein, ki deluje kot znotrajcelični vezavni protein za ščitnični hormon trijodotironin (T3), hkrati pa ima tudi encimsko aktivnost kot NADPH-odvisna ketimin reduktaza. Z vezavo T3 uravnava njegovo lokalno razpoložljivost v celicah in s tem dostop do jedra, kjer je njegova funkcija regulacija izražanja genov. Zaradi pomembne vloge proteina CRYM so motnje v njegovem delovanju povezane z različnimi bolezenskimi stanji. Namen diplomske naloge je bil pripraviti čist rekombinantni protein CRYM v bakterijskem ekspresijskem sistemu (E. coli). Po indukciji izražanja smo optimizirali čiščenje z Ni-afinitetno kromatografijo in z metodama nanoDSF in DLS okarakterizirali termično stabilnost proteina pri različnih vrednostih pH oziroma v prisotnosti naravnih ligandov (T3, T4, NADH, NADPH). Ugotovili smo, da je bil protein CRYM bistveno bolj stabilen v rahlo bazičnih pogojih (pH 8,0), kjer je zavzel biološko aktivno obliko homodimera in bil bolj termično stabilen, medtem ko je v kislem okolju (pH 5,0–7,0) prišlo do agregacije. Rezultati analize vpliva ligandov na stabilnost proteina CRYM niso bili interpretativni, saj je protein tvoril višja oligomerna stanja, kar je preprečilo dostop ligandom do vezavnih mest. Za nedvoumen odgovor bi morali analizo v prihodnosti ponoviti v pogojih, ki zagotavljajo naravno homodimerno obliko proteina.20262026-09-02 13:00:37Diplomsko delo/naloga186499sl