Vpliv TNF-α na nastanek tunelskih nanocevk v rakavih in normalnih urotelijskih celicahBoštjančič, Ava (Avtor) Resnik, Nataša (Mentor) medcelično sporazumevanjeTNF-αTNFAIP2tunelske nanocevkeurotelijske celiceTunelske nanocevke (TNT) so dolgi, tanki cevasti celični izrastki, ki med seboj povezujejo celice ter jim omogočajo medcelično komunikacijo s prenosom celičnih in neceličnih sestavin. TNT sodelujejo v fizioloških in patoloških procesih, zato je razumevanje lastnosti TNT in vplivov na njihov nastanek ključnega pomena za razvoj tarčnih zdravil. V diplomskem delu smo želeli ugotoviti vpliv vnetnega citokina TNF-α, tumor nekrotizirajočega faktorja α, na nastanek TNT pri normalnih in rakavih urotelijskih celicah. Celično linijo normalnih urotelijskih celic SV-HUC-1 in rakavih urotelijskih celic T24 smo tretirali z 1, 10, 20, 30 in 50 ng/mL TNF-α 24 ur. TNT smo označili s faloidinom, ki se veže na aktinske filamente, in s fluorescenčno mikroskopijo analizirali število TNT ter dolžino TNT. Celice SV-HUC-1 in T24 so imele po tretiranju z vsemi koncentracijami TNF-α večje število TNT kot kontrolne celice. Statistično značilno povečanje števila TNT smo ugotovili pri tretiranju celic SV-HUC-1 z 1 ng/mL TNF-α, pri čemer se je število TNT povečalo trikrat v primerjavi s kontrolo. Statistično značilno povečanje števila nastalih TNT je pri celicah T24 povzročilo tretiranje z 20 in 30 ng/mL TNF-α, pri čemer se je število TNT povečalo dvakrat v primerjavi s kontrolo. V dolžini TNT ni prišlo do sprememb pri nobeni od celičnih linij po tretiranju s TNF-α. Po tretiranju s TNF-α smo s prenosom western analizirali TNFAIP2, s tumor nekrotizirajočim faktorjem α induciran protein 2, ki sodeluje pri signalizacijski poti TNF-α/NF-κB. Zmanjšano izražanje TNFAIP2 po 24-urnem tretiranju s TNF-α smo zaznali pri tretiranju celic SV-HUC-1 z 1 in 20 ng/mL TNF-α in povečano izražanje TNFAIP2 pri tretiranju celic T24 z 10 in 50 ng/mL TNF-α. Z izvedbo luminiscenčnega testa viabilnosti celic smo za uporabljene koncentracije TNF-α dokazali, da TNF-α nima citotoksičnega učinka. Celicam SV-HUC-1 se je viabilnost statistično značilno povečala pri tretiranju z 10 ng/mL TNF-α, celicam T24 pa pri tretiranju z 1, 10, 20, 30 in 50 ng/mL TNF-α. Ugotovili smo, da je TNF-α induktor nastanka TNT pri normalnih in rakavih urotelijskih celicah. S tem smo postavili izhodišče za nadaljnje raziskave vloge TNF-α pri medcelični komunikaciji s TNT pri urotelijskih celicah.20262026-09-01 12:45:01Diplomsko delo/naloga186426sl