Vpliv denaturantov na aktivnost rekombinantnega pernizinaGregorič, Filip (Avtor) Poklar Ulrih, Nataša (Mentor) Bahun, Miha (Komentor) Pernizinureagvanidinijev hidrokloriddenaturantiencimska aktivnosttermostabilni encimiDiplomsko delo obravnava vpliv uree in gvanidinijevega hidroklorida na aktivnost rekombinantnega pernizina ter povezavo med spremembami aktivnosti in konformacije encima. Pernizin je termostabilna zunajcelična serinska proteaza iz hipertermofilne arheje Aeropyrum pernix, zato predstavlja zanimiv model za preučevanje delovanja encimov v zahtevnejših pogojih. Proteazna aktivnost je bila določena spektrofotometrično z uporabo azokazeina pri različnih temperaturah in koncentracijah denaturantov, medtem ko so bile konformacijske spremembe spremljane s fluorescenčno spektroskopijo in cirkularnim dikroizmom. Rezultati so pokazali, da prisotnost obeh denaturantov poveča encimsko aktivnost pernizina, pri čemer je bil učinek izrazitejši pri urei. Pri nižji temperaturi je bila pri določenih koncentracijah uree dosežena aktivnost, primerljiva aktivnosti pri višji temperaturi brez dodatka denaturanta. Konformacijske analize so pokazale, da denaturanta vplivata na lokalno okolje triptofanskih ostankov in delno spreminjata sekundarno strukturo proteina, vendar ne povzročita obsežne globalne denaturacije. Dobljeni rezultati nakazujejo, da je vpliv denaturantov na aktivnost pernizina kompleksnejši od zgolj sprememb v njegovi konformaciji.20262026-08-29 07:23:31Diplomsko delo/naloga186243sl