Vpliv različic EPAS1 na izražanje tarčnih genov transkripcijskih dejavnikov HIFMatov, Matea (Avtor) Debeljak, Nataša (Mentor) družinska eritrocitozagen EPAS1različica genaluciferazni reporterski teststabilnost proteinaEritrocitoza je bolezensko stanje, za katero je značilno povečano število eritrocitov in povišane vrednosti hemoglobina. Eden od vzrokov za družinsko eritrocitozo so genetske različice v genu EPAS1 oz. ob hipoksiji inducirani transkripcijski dejavnik HIF2A, ki sodeluje pri uravnavanju eritropoeze. Namen magistrskega dela je bil raziskati funkcionalni vpliv različice EPAS1 (NM_001430.5) c.2120A>C (p.Lys707Thr), ki je opredeljena kot različica z nejasnim pomenom (VUS), ter jo primerjati s patogeno različico EPAS1 (NM_001430.5) c.1609G>A (p.Gly537Arg,) in divjim tipom. Vpliv na transkripcijsko aktivnost smo analizirali z luciferaznim reporterskim testom, vpliv na sintezo proteina EPAS1 z metodo prenosa po westernu ter vpliv na stabilnost proteina s cikloheksamidnim testom. Oba testa smo izvedli v celični liniji HEK293. Rezultati so pokazali povečano transkripcijsko aktivnost na hipoksijo odzivnega elementa (ang. hypoxia responsive element, HRE) v primerjavi z divjim tipom. Obe različici, p.Gly537Arg in p.Lys707Thr, sta v primerjavi z divjim tipom izkazovali nižjo stabilnost proteina EPAS1, kljub višjemu izražanju. Naši rezultati nakazujejo, da lahko različica p.Lys707Thr vpliva na povečano funkcijo proteina EPAS1, kar nakazuje na motnjo v procesa lokalizacije v jedru, kar bi lahko prispevalo k razvoju eritrocitoze. Za dokončno opredelitev patogenosti so potrebne nadaljnje funkcionalne študije.20262026-08-07 07:15:22Magistrsko delo/naloga185501sl