Vzpostavitev večparametrične pretočne citometrije za analizo imunosupresivnih lastnosti regulatornih celic TNagode, Anja (Avtor) Pohar, Jelka (Mentor) regulatorne celice Tkonvencionalne celice Tin vitro test imunosupresijespektralna pretočna citometrijanabor označevalcevproliferacijaRegulatorne celice T so podskupina CD4+ T celic, karakterizirane z izražanjem FOXP3 transkripcijskega faktorja in visokim izražanjem CD25. So ključne za ohranjanje imunske homeostaze saj zavirajo delovanje konvencionalnih efektorskih celic T, in preprečujejo pretirane imunske odzive in razvoj avtoimunosti. Namen magistrske naloge je bil izvesti in vitro supresijski test ter vzpostaviti večparametrični sistem na osnovi spektralne pretočne citometrije za raziskavo imunosupresivnih kapacitet regulatornih celic T. Regulatorne in konvencionalne celice T smo pridobili iz mišjih vranic z optimiziranim postopkom izolacije. Celice smo aktivirali s pomočjo aktivacijskih kroglic ali koktejla za stimulacijo celic. Kontrolna skupina vzorcev je ostala nestimulirana. Med seboj smo primerjali aktivacijo in proliferacijo konvencionalnih celic T v odsotnosti ali ob prisotnosti regulatornih celic T. Preko barvanja celičnih markerjev, ki kažejo na aktivacijo celic, in barvanjem z barvilom CFSE za spremljanje proliferacije, smo s pomočjo spektralne citmetrije ovrednotili imunosupresivno kapaciteto regulatornih celic T v ko-kulturi. Prisotnost regulatornih celic T v vzorcu celic, aktiviranih s kroglicami, statistično značilno zniža izražanje aktivacijskih markerjev - CD25 in CD69. Prisotnost regulatornih celic T vpliva tudi na parametre modeliranja proliferacije - število nedeljenih celic in replikacijski indeks pri vzorcih aktiviranih z aktivacijskimi kroglicami ter odstotek deljenih celic pri vzorcih aktiviranih s koktejlom za stimulacijo celic. In vitro imunosupresijski test predstavlja prvi korak pri preučevanju supresivne kapacitete regulatornih celic T. Znanje pridobljeno s tem testom služi kot osnova za nadaljnje in vivo študije hkrati pa omogoča prenos metodologije tudi na druge celične sisteme, kot so humane ali gensko modificirane celice.20262026-07-17 07:16:54Magistrsko delo/naloga184913sl