Difuzijske lastnosti zrelega biofilma Bacillus subtilisVajngerl, Urška (Avtor) Dogša, Iztok (Mentor) biofilmizunajcelične polimerne snovipolisaharididifuzijadaptomicinodpornost biofilmovBacillus subtilisFRAPmikroskopijaBiofilmi predstavljajo kompleksne mikrobne skupnosti, kjer so celice obdane z zunajceličnimi polimernimi snovmi (EPS), za katere se predpostavlja, da omejujejo transport protimikrobnih snovi v biofilmih. V magistrskem delu smo preučevali difuzijske lastnosti zrelega biofilma bakterije Bacillus subtilis s poudarkom na vplivu zunajceličnega polisaharida EpsA-O na difuzijo, transport in dostopnost fluorescenčno označenega antibiotika daptomicin. Prav tako smo želeli ovrednotiti vpliv velikosti molekul in strukture biofilma na difuzijo ter pojasniti vlogo EpsA-O na zmanjšano učinkovitost, porazdeljevanje in lokalizacijo daptomicina v biofilmu. Difuzijo smo preučevali z metodo FRAP (ang. fluorescence recovery after photobleaching) s fluorescenčno označenimi dekstrani različnih molekulskih mas v vodnih raztopinah in v biofilmu B. subtilis seva divjega tipa ter mutante Δeps, ki ne proizvaja EpsA-O. Rezultati so pokazali, da difuzija pada z naraščajočo molekulsko maso, in da je v biofilmu znatno upočasnjena v primerjavi z vodnimi raztopinami. S konfokalno mikroskopijo smo opazili, da je akumulacija daptomicina v celicah biofilma Δeps višja kot v biofilmu divjega tipa. Analiza kolokalizacije je pokazala sovpadanje daptomicina s celično membrano pri mutanti Δeps, pri divjem tipu pa zamik glede na membrano, kar nakazuje na interakcije z EPS. Kljub nizki koncentraciji in fluorescenčni označitvi daptomicina, smo opazili večjo odpornost biofilma divjega tipa na daptomicin kot pri mutanti Δeps. Poleg tega smo opazili hitrejše zmanjševanje lokalne koncentracije daptomicina v biofilmu divjega tipa, kar nakazuje na dodatne mehanizme prerazporejanja in redčenja antibiotika. Rezultati kažejo, da polisaharid EpsA-O pomembno vpliva na transport, mobilnost, porazdelitev, lokalizacijo in učinkovitost daptomicina ter prispeva k odpornosti biofilma.[U. Vajngerl]20262026-07-12 07:15:50Magistrsko delo/naloga184680sl