Priprava in karakterizacija rekombinantnih enoverižnih fragmentov protiteles proti tRNA-sintetazam MARS in DARS ter proti MATR3Kolbl, Karidia (Avtor) Župunski, Vera (Mentor) scFvMATR3MARSDARSALSamiotrofična lateralna sklerozaAmiotrofična lateralna skleroza (ALS) je neozdravljiva bolezen, ki prizadene zgornje in spodnje motorične nevrone v možganih in hrbtenjači. Prvi simptomi vključujejo motorične motnje, slabo koordinacijo, dizartrijo in disfagijo, kasneje pa nastopi respiratorna odpoved. Razvoj dednega in sporadičnega ALS se pogosto povezuje z napačnim zvitjem RNA-vezavnih proteinov in tvorbo agregatov. Prvi odkrit gen, povezan z ALS, je bil superoksid dismutaza 1 (SOD1), ki pretvarja superoksid v kisik in vodikov peroksid ter povzroča 20 % dedne ALS (fALS) in 1 % sporadične ALS (sALS). Pomemben kasneje odkrit gen je tudi C9orf72, ki ohranja dinamičnosti membrane in sodeluje pri avtofagiji. Mutacije v tem genu povzročajo kar 45 % fALS in 7 % sALS, pri nekaterih bolnikih pa se razvije tudi frontotemporalna demenca. Nato so odkrili še številne gene, povezane z ALS, med drugimi FUS in TARDBP. Aminoacil-tRNA-sintetaze (aaRS) so encimi, ki katalizirajo acilacijo molekule tRNA s pripadajočo aminokislino. Vedno več je opaženih korelacij med aaRS in ALS, saj ti encimi sodelujejo pri translaciji proteinov in interagirajo s proteini SOD1, TARDBP, FUS idr. Zaradi tega smo želeli pripraviti različne rekombinantne enoverižne fragmente protiteles (scFv) proti aaRS, ki so vpletene v ALS, s katerimi bi izvajali imunodetekcijo proteinov pri raziskavah bolezenskih mehanizmov. V sklopu diplomske naloge smo izolirali scFv proti aminoacil-tRNA-sintetazama MARS in DARS ter proti proteinu MATR3. Uporabili smo ekspresijski sistem E. coli BL21 [DE3] in proteine izolirali iz periplazme s pomočjo nikljeve afinitetne kromatografije. Izolirali smo 4,9 mg scFv-ja O-DARS-1 z vrednostjo razmerja A260/A280 0,91, ki pa je bil po prenosu western uspešno dokazan z imunodetekcijo.20262026-07-10 14:50:02Diplomsko delo/naloga184605sl