Določanje površinskih označevalcev na primarnih celicah iz perinatalnih tkiv z metodo pretočne citometrijeKočet, Monika (Avtor) Zupan, Janja (Mentor) Trojner Bregar, Andreja (Komentor) mezenhimske matične/stromalne celice (MSC)perinatalna tkivapretočna citometrijaimunofenotipizacijapovršinski označevalciMezenhimske matične/stromalne celice (MSC) so heterogena populacija multipotentnih celic, za katere so značilne sposobnost samoobnavljanja in diferenciacije v različne celične linije. Za njihovo opredelitev se uporabljajo kriteriji Mednarodnega združenja za celično in gensko terapijo (ISCT), ki vključujejo adherentnost na plastiko, sposobnost diferenciacije v osteogeno, hondrogeno in adipogeno linijo ter značilen imunofenotip (≥ 95 % pozitivnih celic za CD73, CD90 in CD105 ter ≤ 2 % pozitivnih celic za hematopoetske označevalce). MSC lahko izoliramo iz različnih virov, med katerimi imajo danes vse večji pomen perinatalna tkiva, ker predstavljajo etično sprejemljiv in po porodu lahko dostopen vir celic. V magistrski nalogi smo analizirali površinske označevalce primarnih celic, izoliranih iz amnijske membrane in posteljice oziroma decidue. Pri tem smo določali izražanje pozitivnih označevalcev, značilnih za MSC, CD73, CD90 in CD105, ter izražanje hematopoetskih označevalcev CD45, CD235a in CD146. Poleg tega smo preverili tudi, ali med celicami, izoliranimi iz amnijske membrane in posteljice, obstajajo razlike v izražanju preiskovanih označevalcev. Naši rezultati so pokazali, da analizirane primarne celice iz perinatalnih tkiv ne izpolnjujejo kriterijev ISCT za opredelitev MSC. Nobeden izmed analiziranih vzorcev ni hkrati dosegel deleža ≥ 95 % za vse tri pozitivne označevalce CD73, CD90 in CD105 ter deleža ≤ 2 % za hematopoetske označevalce CD45, CD235a in CD146. Pri primerjavi celic, izoliranih iz amnijske membrane in posteljice, nismo ugotovili statistično značilnih razlik v izražanju analiziranih označevalcev. Na rezultate so lahko vplivali biološki in tehnični dejavniki, kot je heterogenost MSC, način izolacije, pogoji gojenja celic ter šibka vezava uporabljenih protiteles za analizo s pretočno citometrijo. Na podlagi pridobljenih rezultatov smo ugotovili, da bi bilo za natančnejšo imunofenotipsko karakterizacijo primarnih celic iz perinatalnih tkiv smiselno razširiti panel površinskih označevalcev, optimizirati protokol imunofenotipizacije ter analizo izvesti na večjem številu vzorcev.[M. Kočet]20262026-07-07 08:46:44Magistrsko delo/naloga184422sl