Vrednotenje funkcionalnosti transficirane celične linije Jurkat z genskim konstruktom za glukokortikoidni receptorHorvat, Nika (Avtor) Sollner Dolenc, Marija (Mentor) Franko, Nina (Komentor) citokinideksametazonglukokortikoidni receptorJurkat celicemifepristonGlukokortikoidi so pomembni regulatorji imunskega odziva, njihovo delovanje pa poteka preko glukokortikoidnega receptorja, ki po vezavi liganda uravnava izražanje številnih genov in vpliva na izločanje citokinov. Celična linija Jurkat zaradi nizke bazalne ravni funkcionalnega glukokortikoidnega receptorja kaže odpornost na glukokortikoide, zato je njena uporabnost za raziskovanje glukokortikoidno posredovanih mehanizmov omejena. Namen magistrske naloge je bil ovrednotiti uspešnost transfekcije in funkcionalnost modificirane celične linije Jurkat GR, v katero je bil z metodo nukleofekcije vnesen genski konstrukt za človeški glukokortikoidni receptor. Primerjali smo izvorno celično linijo Jurkat in modificirano linijo Jurkat GR po izpostavitvi deksametazonu kot agonistu glukokortikoidnega receptorja ter mifepristonu kot njegovemu antagonistu. Celice smo aktivirali z ionomicinom in forbol-12-miristat 13-acetatom. Funkcionalnost receptorja smo ovrednotili na ravni izražanja genov in izločanja citokinov. Z metodo kvantitativne verižne reakcije s polimerazo v realnem času smo analizirali izražanje genov za glukokortikoidni receptor, interlevkin 2, glukokortikoidno inducirano levcinsko zadrgo in kriopirin. Z encimsko-imunsko metodo na trdnem nosilcu smo določili koncentracije izločenih citokinov interlevkina 2 in interlevkina 8. Dobljeni rezultati so pokazali, da modificirana celična linija Jurkat GR izraža funkcionalen glukokortikoidni receptor in se odziva na delovanje deksametazona in mifepristona. V primerjavi z izvorno celično linijo so bile v Jurkat GR celicah izrazitejše spremembe v izražanju glukokortikoidno odzivnih genov, predvsem povečano izražanje glukokortikoidno inducirane levcinske zadrge ter zmanjšano izražanje interlevkina 2. Poleg tega pa je deksametazon v Jurkat GR celicah zmanjšal izločanje interlevkina 2 in interlevkina 8, medtem ko so bili učinki v izvorni celični liniji šibkejši ali odsotni. Dodatek mifepristona je delno ali v celoti zavrl učinke deksametazona, kar dodatno potrjuje funkcionalnost vnesenega receptorja. Na podlagi rezultatov smo ugotovili, da je bila transfekcija celične linije Jurkat uspešna in da modificirana celična linija Jurkat GR predstavlja primeren model za raziskovanje signalnih poti in imunskih učinkov glukokortikoidov na limfocite T. Rezultati prispevajo k boljšemu razumevanju delovanja glukokortikoidnega receptorja ter mehanizmov občutljivosti oziroma odpornosti Jurkat celične linije na glukokortikoide.[N. Horvat]20262026-07-04 08:46:00Magistrsko delo/naloga184332sl