Priprava zunajceličnih delov potencialnih interakcijskih partnerjev EpCAMMajerle, Nina (Avtor) Pavšič, Miha (Mentor) EpCAMpotencialni interakcijski partnerjiinsektne celiceizražanje rekombinantnih proteinovafinitetna kromatografijaEpCAM je transmembranski glikoprotein tipa I, ki sodeluje pri embrionalnem razvoju, delovanju epitelija ter celični proliferaciji, migraciji in adheziji. Poleg tega prispeva k razvoju in napredovanju raka, zato predstavlja pomemben tumorski označevalec in obetavno terapevtsko tarčo. EpCAM je vključen v različne signalne poti, med katerimi je najpomembnejša Wnt/β-kateninska signalna pot, ki je aktivirana prek regulirane intramembranske proteolize (RIP). Cepitev zunajceličnega dela EpCAM (EpEX), ki aktivira RIP, je najverjetneje regulirana s strani interakcij z drugimi proteini. Cilj diplomskega dela je bil pripraviti rekombinantne zunajcelične dele proteinov FZD7, EphB2 in MMP14, ki so bili identificirani kot potencialni interakcijski partnerji EpCAM in so morda z njim tudi funkcijsko povezani. V okviru diplomskega dela smo pripravili tri rekombinantne ekspresijske plazmidne vektorje, ki so vsebovali zapise za zunajcelične dele proteinov FZD7, EphB2 in MMP14, vključno z N-končnimi signalnimi peptidi in C-končnimi Strep-tag II oznakami. S pripravljenimi plazmidi smo prehodno transfecirali insektne celice High Five in uspešno izrazili rekombinantna zunajcelična dela proteinov FZD7 in MMP14. Poskusili smo ju tudi izolirati iz supernatantov celičnih kultur s Strep-Tactin afinitetno kromatografijo, vendar nam to ni uspelo, predvidoma zaradi nizkih ravni izražanja ali obarjanja pri dializi.20262026-06-30 10:40:03Diplomsko delo/naloga184135sl