Vrednotenje izločanja heterolognih proteinov iz bakterije Streptomyces rimosus s prilagoditvijo presejalnega testa na manjše meriloMedved, Gašper (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Mrak, Peter (Komentor) streptomiceteStreptomyces rimosusheterologno izražanjekaminizinmCherrypresejalni testfluorescencavir dušikaoptimizacija gojiščBakterije rodu Streptomyces so znane po proizvodnji številnih sekundarnih metabolitov, kot je na primer široko spektralni antibiotik oksitetraciklin. V preteklem desetletju pa so aktinomicete vzbudile zanimanje raziskovalcev, kot celične tovarne za izražanje heterolognih proteinov. V zasnovi te magistrske naloge smo izbrali tri seve Streptomyces rimosus, zasnovane za izločanje proteaze kaminizina, s poročevalskim sistemom fluorescentnega proteina mCherry. V eksperimentalnem delu smo z namenom optimizacije standardnega biosinteznega procesa opredelili morfologijo rasti izbranih sevov v tekočem gojišču, testirali vpliv različnih vrst inokuluma na rast kulture in izločanje heterolognega proteina. Optimizacijo procesa smo primerjali v volumnih 40 mL in 5mL in izvedli prehod na manjšo skalo v 3 mL. Ob uspešnem prehodu na manjše merilo smo s ciljem po povečanem izločanju proteina mCherry raziskali možnosti re-optimizacije GOTC gojišča. Zamenjava vira dušika iz kazeinskega triptona na sojine beljakovinske koncentrate in sojine moko je privedla do znatne spremembe v izločanju heterolognega proteina kaminizina. Po zamenjavi triptona, smo z uporabo beljakovinskega koncentrata iz sojine moke dosegli vsaj 30 % višje vrednosti fluorescence poročevalskega sistema mCherry.[G. Medved]20262026-03-22 07:15:52Magistrsko delo/naloga181009sl