Transformacija bakterij Pseudomonas spp. s plazmidom z zapisom za fluorescentni in/ali luminiscentni proteinDostal, Manca (Avtor) Klančnik, Anja (Mentor) Berlec, Aleš (Komentor) Pseudomonas fragiPseudomonas aeruginosafluorescencamTagBFPmCherry planktonske celicebiofilmBakterije vrste Pseudomonas fragi in Pseudomonas aeruginosa zaradi sposobnosti tvorbe biofilma pomenijo velik izziv, saj jim biofilm omogoča preživetje tudi v neugodnih pogojih zdravstvenega in industrijskega okolja. Biofilmi bakterijam zagotavljajo dodatno zaščito pred zunanjimi vplivi, kar otežuje njihovo odstranjevanje. V magistrski nalogi smo vzpostavili metodo za detekcijo in kvantifikacijo bakterij P. fragi z uporabo fluorescentnih proteinov. Najprej smo pripravili plazmida pBBR1MCS-2_mTagBFP2 in pBBR1MCS-2_mCherry, ki nosita gene za izražanje fluorescentnih proteinov mTagBFP2 in mCherry, ter z elektroporacijo izvedli transformacijo bakterij. Pridobljene transformirane bakterije P. fragi in P. aeruginosa, ki so izražale fluorescentne proteine, smo uporabili za identifikacijo bakterij v planktonskih obliki in v obliki biofilmov. Meritve intenzitete flourescentne svetlobe so pokazale korelacijo med rastjo bakterij in intenziteto izražanja fluorescentnih označevalcev pri bakteriji P. fragi, s čimer smo potrdili zanesljivost predlagane metode. Vzpostavljena metoda je hitra, natančna in ponovljiva, kar omogoča natančno kvantifikacijo bakterijskih populacij v različnih eksperimentalnih pogojih. Poleg tega so transformirane bakterije P. fragi ohranile sposobnost tvorbe biofilmov, kar potrjuje uporabnost fluorescentnih označevalcev za preučevanje rasti bakterij in njihove pritrditve na površine. Vzpostavljena metoda je nov način detekcije bakterij v obliki biofilma, kar odpira nove možnosti za razvoj strategij za preprečevanje in nadzor biofilmov ter zmanjšanje tveganj za bakterijske kontaminacije in okužbe.[M. Dostal]20252025-12-20 07:15:25Magistrsko delo/naloga177304sl