Priprava izbranih rekombinantnih proteinov z vgrajeno alkinsko ročico z uporabo nenaravne aminokisline 4-propargiloksi-L-fenilalaninaStojić, Ivana (Avtor) Gazvoda, Martin (Mentor) nenaravna aminokislinaalkinska ročicaRimMBRPlektin (OAA)Sinteza nenaravnih aminokislin in njihova vgradnja v proteine sta napredna procesa, ki omogočata širjenje funkcionalnosti in izboljšanje lastnosti proteinov. V sklopu diplomskega dela smo sintetizirali nenaravno aminokislino, (S)-2-amino-3-(4-prop-2-inoksifenil)propanojsko kislino, z vgrajeno alkinsko ročico. Kemijsko sintezo smo izvedli v treh stopnjah iz Boc-L-tirozina. V nadaljnjem postopku priprave rekombinantnih proteinov N-končne domene proteina RimM (angl. ribosome maturation factor) iz organizma Thermus thermophilus, BRP (angl. bleomycin resistance protein) iz organizma Streptoalloteichus hindustanus in lektina iz organizma Oscillatoria agardhii, smo poskusili sintetizirano nenaravno aminokislino vgraditi na željeno mesto v proteinu. Uporabili smo metodo vgradnje, ki temelji na supresiji stopkodona (TAG). Zapise za proteine smo z uporabo vektorjev pET28(+) in pEVOL-pRpF izrazili v E. coli. Komplementarno smo, s t.i. metodo biokonjugacije, z uporabo NHS-reagentov na protein uvedli alkinsko ročico v različnih razmerjih. Kemijsko reaktivnost alkinske ročice, uvedene v izbrane proteine, smo preverili z Glaser-Hayevo biokonjugacijo in reakcijo končnega alkina s cisteinom.20252025-12-04 10:47:35Diplomsko delo/naloga176574sl