Razvoj postopkov enkapsulacije bakteriofagov z liofilizacijoRus, Ana (Avtor) Podgornik, Aleš (Mentor) bakteriofagigojenjeformulacijeliofilizacijaenkapsulacijaPopulacija bakterij odpornih na antibiotike se povečuje, zato so nujno potrebni drugačni pristopi k zdravljenju. Uničenje patogena z bakteriofagi predstavlja velik potencial, ki lahko zniža delež obolelih za bakterijskimi okužbami kot je salmonela. Trenutno so v uporabi tekoče formulacije, ki so manj stabilne kot liofilizirane in enkapsulirane. Namen magistrske naloge je bil pripraviti stabilnejšo obliko bakteriofagov s postopki liofilizacije in enkapsulacije. Pri delu smo uporabili bakteriofag za bakterijo Salmonella enterica. Bakteriofagom smo v manjših volumnih (20 in 100 mL) določili optimalne pogoje za gojenje (OD600 in multicipliteto okužbe) in jih namnožili v večjem volumnu (500 mL). Namnoženim bakteriofagom smo v postopku filtracije s tangencialnim tokom (TFF) zamenjali gojišče s pufrom TRIS-NaCl. Z dodatkom pomožnih snovi smo pripravili formulacije tako, da smo bakteriofagom smo dodali trehalozo, laktozo, L-levcin in MgSO4. Liofilizatu smo z analitskimi metodami (metoda Karl-Fischer in meritve izgub pri sušenju) določili delež vlage, temperaturo steklastega prehoda (Tg) pa smo določili z metodo diferenčne dinamične kalorimetrije. Ugotovili smo, da je delež vlage v vzorcu povezan z vrednostjo Tg. Vzorec z dodano laktozo je vseboval najnižji delež vlage in je imel najvišjo vrednost Tg. Testirali smo stabilnost liofilizata za vse tri formulacije v časovnem obsegu 28 dni. Formulacije smo shranjevali pri temperaturah 2-8 °C in 25 °C. Opazili smo, da so vzorci shranjeni pri nižji temperaturi ohranili večjo stabilnost. Med njimi je vzorec z dodano laktozo ohranil najvišji titer. Liofilizirane bakteriofage smo napolnili v tržno pridobljene kapsule in nanje nanesli enterični premaz. Izvedli smo test raztapljanja v simulirani želodčni raztopini in jih nato raztopili v nevtralnem pufru TRIS-NaCl. Opazili smo, da je najvišji titer ohranil vzorec z dodano laktozo.[A. Rus]20252025-11-19 07:15:11Magistrsko delo/naloga176034sl