Razvoj oblik proteina Ninjurin 1 za nadzorovano sprožitev celične smrtiHvalič, Aneja (Avtor) Hafner Bratkovič, Iva (Mentor) Ninjurin 1NINJpoškodba plazemske membranePMRnadzorovana celična smrtNINJ1 posreduje poškodbo celične membrane (PMR), ki predstavlja zadnji korak pri imunogeni celični smrti (ICD), pri kateri pride do sproščanja znotrajceličnih komponent. Te spodbudijo imunski odziv, kar odpira možnosti za uporabo nadzorovane celične smrti (RCD) v terapevtske namene, kot je zdravljenje imunogenih rakavih tumorjev. V magistrskem delu smo razvijali oblike proteina NINJ1, ki bi omogočile nadzorovano celično smrt preko poškodbe plazemske membrane. V eksperimentalnem delu smo se osredotočili na razvoj zaklenjenih konstruktov NINJ1, pri katerih smo na N- in C-konec NINJ1 dodali segmente in domene, ki homo- ali heterodimerizirajo. Ti konstrukti so bili načrtovani tako, da bi jih lahko odpirali na različne načine. Učinkovitost smo preverjali glede na citotoksičnost divjega tipa proteina NINJ1. Transficirali smo celice HEK293T in potrdili izražanje vseh načrtovanih konstruktov s prenosom western in encimsko-imunskim testom. Citotoksičnost smo merili s testom privzema propidijevega jodida. Rezultati so potrdili, da prekomerno izražanje NINJ1 vodi v PMR in posledično celično smrt. Pri testiranju citotoksičnosti zaprtih konstruktov NINJ1 v primerjavi z divjim tipom proteina nismo pridobili statistično značilnih razlik. Kljub negativnim rezultatom smo s pomočjo novih objavljenih študij o strukturi NINJ1 pripravili smernice za nadaljnji razvoj konstruktov, ki bi bili prilagojeni tudi za aktivacijo v tumorskem mikrookolju.20252025-11-01 07:15:40Magistrsko delo/naloga175530sl