Optimizacija izolacije zunajceličnih veziklov pridobljenih iz različnih mezenhimskih matičnih celic za regeneracijo roženiceGabrovšek, Ana (Avtor) Maličev, Elvira (Mentor) zunajcelični veziklimezenhimske matične celicegojenje celicizolacija veziklovultracentrifugiranjeanaliza sledenja nanodelcevslikovna pretočna citometrijaRaziskovali smo vpliv vira mezenhimskih matičnih celic (MSC), števila pasaž, trajanja inkubacije v brezserumskem mediju in postopka izolacije na količino pridobljenih zunajceličnih veziklov (EV). Gojili smo MSC iz kostnega mozga (BM-MSC), maščobnega tkiva (AT-MSC) in popkovine (UC-MSC), EV pa analizirali s pomočjo analize sledenja nanodelcev (NTA) in slikovne pretočne citometrije (IFC). Naši rezultati so pokazali, da imajo največji donos zunajceličnih veziklov UC-MSC, da daljša inkubacija v brezserumskem mediju (48 h) omogoča pridobivanje večjega števila EV v primerjavi s 24 h, da je višji donos EV v višjih pasažah ter da sta velikost in velikostna porazdelitev EV med različnimi viri in pasažami primerljivi. Dvojno ultracentrifugiranje s spiranjem je prineslo manjši donos EV v primerjavi z enojnim ultracentrifugiranjem. Primerjava rezultatov NTA in IFC je pokazala linearno korelacijo rezultatov obeh metod, čeprav smo z NTA dobili večje vrednosti. Pri postavljanju postopka za optimizacijo izolacije EV je potrebno upoštevati tudi tip MSC, pogoje gojenja in izbiro metode centrifugiranja. Pridobljeni podatki so pomembni za nadaljnjo uporabo EV v regenerativni medicini, med drugim tudi pri zdravljenju poškodb roženice.20252025-10-01 07:16:10Magistrsko delo/naloga174294sl