Nevirusno urejanje genoma T-celične linije Jurkat za izbitje tarčnega gena TRAC in vnos zapisa za zeleni fluorescenčni protein z uporabo sistema CRISPR/Cas9Kunej, Klemen (Avtor) Smole, Anže (Mentor) Imunoterapija rakacelična terapijaCRISPR/Cascelična linija JurkatTCRImunoterapija predstavlja enega obetavnejših pristopov v sodobnem zdravljenju raka, saj temelji na preusmerjanju in krepitvi bolnikovega lastnega imunskega sistema za specifično prepoznavanje in uničevanje rakavih celic. Pomembno strategijo na tem področju predstavlja genetsko inženirstvo celic T, kjer tehnologije, kot je CRISPR/Cas, omogočajo natančno in učinkovito spreminjanje imunskih celic za terapevtsko uporabo. V tem magistrskem delu smo razvili in optimizirali nevirusno metodologijo za urejanje genoma v celični liniji Jurkat, ki predstavlja model za celice T. Z uporabo ribonukleoproteinskih (RNP) kompleksov, sestavljenih iz Cas9 in enojne usmerjevalne RNA (sgRNA), smo uspešno izvedli izbitje tarčnega gena TRAC, ki kodira komponento T-celičnega receptorja (TCR). Nadalje smo s posredovanjem popravljanja na osnovi homologije (HDR) v isti genomski lokus uspešno vstavili zapis za reporterski protein GFP. Učinkovitost in stabilnost genetskih sprememb smo spremljali s pretočno citometrijo. Rezultati potrjujejo, da predstavljena metodologija omogoča tako učinkovito izbitje genov kot tudi tarčno integracijo želenega konstrukta, kar predstavlja pomemben korak k razvoju nevirusnih strategij za genetsko inženirstvo celic T v okviru celične imunoterapije raka.20252025-09-25 08:25:00Magistrsko delo/naloga173932sl