Zaznavanje genotoksičnega delovanja ksenobiotikov z naprednim jetrnim in vitro 3D celičnim modelomHam, Vito (Avtor) Žegura, Bojana (Mentor) Štampar, Martina (Komentor) HepG2sferoidiin vitro 3D celični modelksenobiotikigenotoksičnostcitotoksičnostpoliciklični aromatski ogljikovodikipretočna citometrijareverzna transkripcija in verižna reakcija s polimerazoKsenobiotiki predstavljajo pomembno tveganje za zdravje ljudi zaradi svoje sposobnosti povzročanja poškodb DNK, ki lahko vodijo v rakava obolenja, kronične bolezni in druge patološke spremembe. Konvencionalni 2D celični modeli in in vivo živalski poskusi imajo številne omejitve pri ponazarjanju človeške presnove, zato in vitro 3D modeli predstavljajo napredno alternativo pri ocenjevanju genotoksičnosti. V okviru magistrskega dela smo optimizirali in validirali dinamičen in vitro 3D model sferoidov iz celične linije HepG2, ki smo ga uporabili za preučevanje genotoksičnih učinkov policikličnih aromatskih ogljikovodikov (PAH). V prvem raziskovalnem sklopu smo spremljali rast, diferenciacijo in presnovno aktivnost sferoidov tekom njihovega gojenja. Rezultati so pokazali celovito stabilnost sferoidov tekom njihovega gojenja, postopno zorenje in največjo presnovno aktivnost med 17. in 22. dnem starosti sferoidov, potrjeno z izražanjem jetrnih markerjev (ALB, CK18, HNF4α) ter induciranih presnovnih encimov (CYP1A1, CYP3A4, NAT2, UGT1A1). Na podlagi teh rezultatov smo kot optimalno izbrali 21 dni stare sferoide. V drugem raziskovalnem sklopu smo sferoide izpostavili PAH-om benzo(g)perilen (BGP), benzo(b)fluoranten (BBF) in njuno binarno mešanico ter benzo(a)piren (BaP) za 24 in 96 ur. Z uporabo metode pretočne citometrije smo pokazali, da BGP poveča P21- in γH2AX-pozitivnih celic, medtem ko BBF in BaP dodatno povečata procent GADD45α-pozitivnih celic. Mešanica ni izkazala sinergističnih učinkov. Višje koncentracije so povzročile izrazitejše odzive, medtem ko so rezultati dolgotrajne izpostavitve nakazovali bodisi aktivacijo popravljalnih mehanizmov bodisi akumulacijo poškodb, odvisno od vrste PAH-a. Na podlagi izraženih markerjev smo ocenili genotoksični potencial v zaporedju: BGP < BBF < BaP.[V. Ham]20252025-09-21 07:17:36Magistrsko delo/naloga173749sl