Vpliv diferenciacijske stopnje celic urotelija na izražanje mehanoreceptorjev PiezoDeutsch, Maja (Avtor) Romih, Rok (Mentor) urotelijproteini Piezodiferenciacijaprenos westernimunofluorescencaelektronska mikroskopijaDokončno diferenciran urotelij sečnega mehurja med mikcijskimi cikli vzdržuje krvno- urinsko pregrado in ima pomembno mehanosenzorično vlogo. Ključni mediatorji tega zaznavanja so mehanosenzorični ionski kanali, med njimi tudi kanala Piezo1 in Piezo2. Namen magistrske naloge je bil proučiti izražanje in lokalizacijo proteinov Piezo v različno diferenciranih urotelijskih celicah in vivo ter in vitro ter pokazati njuno povezavo s proteini medceličnih stikov in citoskeleta. Ugotovili smo, da je bil mišji urotelij sestavljen iz 3 skladov, medtem ko je imel podganji 1-2 sklada. V dežnikastih celicah so bili prisotni zreli fuziformni vezikli, imunooznačevanje uroplakinov pa je pokazalo njihovo močno izražanje. Pri podgani so bili prisotni urotelijski plaki in tesni stiki. Izražanje Piezo1 in Piezo2 smo pri miših in podganah potrdili v uroteliju in tkivih pod urotelijem (lamina propria, mišica) s prenosom western, pri čemer so bile lise šibkejše pri uroteliju. Izražanje proteinov Piezo smo potrdili tudi v celičnih linijah SV-HUC-1, RT4 in T24. Imunofluorescenčna analiza je pokazala Piezo1 na bazolateralni plazmalemi ter citosolu dežnikastih celic ter plazmalemi vmesnih in bazalnih celic. Označevanje obeh Piezo z imunoelektronsko mikroskopijo na ultratankih rezinah je bilo negativno, medtem ko je postopek ločevanja celic urotelija z dodatkom EDTA pokazal prisotnost Piezo1 na plazmalemi. V in vitro modelih se je pokazalo, da je bil signal za Piezo1 pri normalnih SV-HUC-1 prisoten v citoplazmi, pri Piezo2 tudi na plazmalemi, pri RT4 (neinvazivni karcinom) v citoplazmi, pri T24 (invazivni karcinom) pa je bilo izražanje proteinov Piezo zelo nizko. V uroteliju sta bila E-kadherin in β-katenin prisotna na vseh plazmalemah, razen apikalne, β-aktin pa ob adherentnih stikih. Reakcija za vinkulin je bila negativna. Kolokalizacije med proteini Piezo in E-kadherinom ali β-aktinom nismo zaznali, zaznali pa smo potencialno kolokalizacijo med Piezo1 in β-kateninom. Rezultati kažejo, da je urotelij sečnega mehurja miši in podgan dokončno diferenciran. Proteinov Piezo je v urotelijskih celicah malo v primerjavi s tkivi pod urotelijem. Dokazali smo, da je v modelu in vitro izražanje proteinov Piezo odvisno od diferenciacijske stopnje, medtem ko v normalnem uroteliju miši tega nismo mogli dokazati. Pokazali smo razporeditev proteinov medceličnih stikov in citoskeleta v uroteliju, vendar nismo potrdili povezave s Piezo1 ali Piezo2, ki bi kazala na aktivacijo s prenosom mehanske sile preko nitastih proteinov.20252025-09-15 08:05:00Magistrsko delo/naloga173242sl