Priprava plazmidov z vključenimi tarčami hsa-miR-375-3p in njihovo potrjevanje z luciferaznim testom v celičnih linijah HeLa in HOSKovšca, Živa (Avtor) Ostanek, Barbara (Mentor) Vrščaj, Lucija Ana (Komentor) kostna prenovahsa-miR-375-3pFZD4BMPR2luciferazni testmiRNA so majhne nekodirajoče molekule, ki s svojim delovanjem vplivajo na številne fiziološke procese. Med njimi je tudi kostna prenova, kjer uravnavajo ravnovesje med razgradnjo in gradnjo kosti. Namen naloge je bil poiskati in ovrednotiti tarčne gene hsa-miR-375-3p, ki je bila v predhodnih študijah na Katedri za klinično biokemijo Fakultete za farmacijo identificirana kot diferencialno izražena miRNA pri izpostavitvi mezenhimskih matičnih celic osteoanabolni zdravilni učinkovini teriparatidu. Z bioinformatično analizo smo določili tarčna gena FZD4 in BMPR2, ki sta vključena v signalne poti kostne prenove. Zasnovali smo mutirane in nemutirane konstrukte obeh genov in jih vstavili v plazmide pmirGLO. V celice celičnih linij HeLa in HOS smo kotransfecirali plazmide z vstavljenimi konstrukti in mimike hsa-miR-375-3p. Z luciferaznim testom smo preverili interakcijo med hsa-miR-375-3p in tarčnimi geni. Interakcijo med hsa-miR-375-3p in FZD4 smo potrdili v celični liniji HOS, ne pa tudi v celični liniji HeLa. V celični liniji HeLa se je hsa-miR-375-3p z večjo afiniteto vezala na mutirano zaporedje BMPR2 kot na nemutirano zaporedje BMPR2. To nakazuje, da lahko ustvarjena mutacija gena BMPR2 predstavlja genetski dejavnik tveganja za razvoj kostnih boleznih. Medtem v celični liniji HOS nismo potrdili interakcije med hsa-miR-375-3p in BMPR2. Na osnovi naših rezultatov smo ugotovili, da hsa-miR-375-3p igra potencialno vlogo v kostni prenovi, saj je tvorila interakcijo z genom FZD4, ki je vključen v signalno pot Wnt/β- katenin, ki vpliva na razvoj in delovanje osteoblastov ter gradnjo kosti.20252025-09-12 08:45:27Magistrsko delo/naloga173006sl