Razvoj in optimizacija nabora označevalcev za karakterizacijo in fenotipizacijo celic gama delta T s pretočno citometrijoKokelj, Pia (Avtor) Smole, Anže (Mentor) Leben, Katja (Komentor) celice gama delta Tpretočna citometrijanabor označevalcevfenotipizacijakarakterizacijaCelice gama delta (γδ) T pri zdravih posameznikih predstavljajo med 1 in 5 % celic T, vendar se njihova pogostost in sestava podskupin lahko izrazito spremenita ob različnih bolezenskih stanjih. Namen magistrske naloge je bil vzpostaviti in optimizirati protokol barvanja ter analize na spektralnem pretočnem citometru za večbarvno fenotipizacijo imunskih celic, s poudarkom na celicah γδ T in njihovih podskupinah (Vδ1, Vδ2, Vγ9). Identifikacijo izbranih populacij smo izvedli z uporabo označevalcev za specifične celične markerje na mononuklearnih celicah periferne krvi (MCPK) in analizo s spektralnim pretočnim citometrom. V treh sklopih poskusov smo optimizirali barvanje z barvilom za določanje živosti celic, površinsko barvanje s preliminarnim naborom 18 fluoroforjev ter razširjeno površinsko in znotrajcelično barvanje z naborom 30 fluoroforjev. Optimizirali smo tudi postopek izolacije MCPK iz dveh vrst začetnega materiala: levkocitno-trombocitne plasti in polne heparinizirane periferne krvi, pri čemer smo uporabili vzorce treh zdravih odraslih darovalcev za vsako vrsto materiala. Hkrati smo primerjali tudi štiri različne pristope shranjevanja celic pred barvanjem. Razviti razširjeni nabor 30 fluoroforjev predstavlja osnovo za nadaljnjo uporabo pri analizi relevantnih kliničnih vzorcev.20252025-08-31 07:17:15Magistrsko delo/naloga171715sl