Vpliv enkratnega odmerka antagonistov mehansko občutljivih kanalov na znotrajcelično koncentracijo kalcija in laktata v astrocitih v kulturiGržina, Živa Tajda (Avtor) Kreft, Marko (Mentor) AstrocitiL-laktatCa2+cAMPTRPV4Piezo1FRETAstrociti, najštevilčnejše celice glije, so danes prepoznani kot aktivni in nepogrešljivi udeleženci v delovanju osrednjega živčnega sistema. Njihove vloge so raznolike: od presnovne podpore nevronom, sodelovanja pri sinaptičnem prenosu, do kompleksne znotrajcelične signalizacije s kalcijem in drugimi sekundarnimi obveščevalci. Novejše raziskave jih opredeljujejo tudi kot intrakranialne baroreceptorje, ki preko mehansko občutljivih kanalov, kot sta TRPV4 in Piezo1, sprejemajo spremembe v možganskem krvnem pretoku, ter tako sodelujejo pri uravnavanju možganske perfuzije. Namen magistrske naloge je bil ovrednotiti vpliv antagonistov kanalov TRPV4 (HC-067047 in RN-1734) ter antagonista kanalov Piezo1 (Dooku1) na koncentracijo presnovka laktata in obveščevalnih molekul cAMP in Ca2+ , s čimer smo želeli prispevati k razumevanju specifičnosti teh antagonistov in njihovo uporabnost pri raziskovanju povezave med mehanskim zaznavanjem, presnovo in celično signalizacijo. Za spremljanje dinamičnih sprememb v posameznih celicah v živo smo uporabili fluorescenčne mikroskopske metode. Z metodo prenosa energije z resonanco fluorescence (FRET) in v kombinaciji z genetsko kodiranimi nanosenzorji Laconic in Epac1-camps smo merili koncentracije laktata in cAMP. Dinamiko znotrajceličnega kalcija smo spremljali s fluorescenčno mikroskopijo z visoko občutljivim kalcijevim barvilom Calbryte 520 AM. Naši rezultati so pokazali, da akutni dodatek antagonista TRPV4 kanalov HC-067047 povzroči zvečanje mehansko odvisnih znotrajceličnih sprememb koncentracije laktata, ne vpliva pa na spremembe v koncentraciji cAMP. Antagonist kanalov Piezo1, Dooku1, povzroči prehodne spremembe znotrajceličnega kalcija, medtem ko antagonist TRPV4 kanalov RN-1734 nima zaznavnega učinka. Pokazali smo tudi, da antagonist HC-06747 kanalov TRPV4 vpliva na morfologijo astrocitov ter povzroči zvišanje bazalne koncentracije cAMP. Rezultati kažejo, da ima akutni dodatek antagonistov nespecifične učinke, zato pri uporabi velja previdnost.[Ž. T. Gržina]20252025-08-30 07:15:14Magistrsko delo/naloga171668sl