Merjenje kinetike disociacije dolgih na novo načrtovanih obvitih vijačnicKrisper, David (Avtor) Ljubetic, Ajasja (Mentor) obvite vijačniceproteinska kinetikade novo načrtovanje proteinovRaziskovali smo dolge, de novo načrtovane obvite vijačnice osnovane na naravnem proteinu tropomiozinu. Zaradi svoje modularnosti in specifičnega povezovanja imajo velik potencial pri razvoju nanomaterialov ter v biomedicinskih aplikacijah. Širši namen naloge je prenesti princip izpodrivanja verige z oprimkom iz sveta DNA na obvite vijačnice. Osredotočili smo se na tropomiozinski par C12, D12 in njune različice, ki smo jih uspešno izrazili, izolirali in očistili. S kombinacijo metod kromatografije z ločevanjem po velikosti z večkotnim detektorjem sipanja svetlobe (SEC-MALS), cirkularnim dikroizmom (CD) in izotermično titracijsko kalorimetrijo (ITC) smo potrdili njihovo molekulsko maso, sekundarno strukturo in afiniteto vezave. Z metodo razdeljene luciferaze NanoLuc smo določili konstanto disociacije. Z metodama prenosa energije z resonanco fluorescence (FRET) in razdeljene luciferaze NanoLuc smo pokazali potencialno izpodrivanje obvitih vijačnic s pomočjo oprimka, kar potrjuje, da imajo obvite vijačnice potencial za načrtovanje dinamičnih proteinskih sistemov.20252025-07-17 07:15:21Magistrsko delo/naloga170809sl