Ravni izražanja izooblik enolaze pri polarizaciji celic mikroglijeHabjan, Liza (Avtor) Pišlar, Anja (Mentor) Horvat, Selena (Komentor) mikroglijapolarizacijaenolazanevrotrofični dejavnikikatepsin XNevrodegenerativne bolezni predstavljajo velik javnozdravstveni problem brez učinkovitih načinov zdravljenja. Zanje je značilen postopni propad nevronov, pri čemer pomembno vlogo igra tudi nevrovnetje z aktivacijo mikroglije. Ob prisotnosti dražljajev se celice mikroglije polarizirajo v vnetni fenotip M1, kar spodbudi izločanje vnetnih dejavnikov, ali nevroprotektivni fenotip M2, pri katerem se poviša izločanje nevrotrofičnih dejavnikov. Slednjim podobno delovanje izkazuje tudi γ-enolaza. Gre za glikolitični encim, ki se pojavlja v več izooblikah, njegova γ-izooblika pa spodbuja preživetje nevronov in rast nevritov. V okviru magistrske naloge smo zato želeli ovrednotiti izražanje izooblik enolaze v posameznem fenotipu mikroglije. Najprej smo postavili celični model polarizirane mikroglije, pri čemer smo uporabili celično linijo BV2. Polarizacijo celic v fenotip M1 smo spodbudili z lipopolisaharidom (LPS) ali interferonom gama (IFN-γ) ter v fenotip M2 z interlevkinom-4 (IL-4) ali interlevkinom-13 (IL-13) in fenotipa potrdili z izražanjem značilnih fenotipskih označevalcev. Nadalje smo določili glikolitično aktivnost enolaze v polarizirani mikrogliji in ugotovili, da se ta zniža v celicah, stimuliranih z IFN-γ. Nadaljevali smo z vrednotenjem ravni izražanja izooblik enolaze v polariziranih celicah mikroglije z metodama prenosa po westernu in encimsko-imunskim testom, pri čemer smo dobili neskladne rezultate, ki pa nakazujejo na uravnavanje izooblik enolaze v odvisnosti od polarizacije mikroglije v posamezen fenotip. Nadalje smo preučevali tudi raven sinteze aktivne oblike γ-enolaze in njeno izločanje iz stimuliranih celic BV2. Raven sinteze aktivne oblike γ-enolaze se poviša v celicah BV2 polarizirane v fenotip M1, hkrati pa se pri tem fenotipu aktivna oblika γ-enolaze povišano izloča iz aktivirane mikroglije. Nenazadnje smo uravnavanje aktivne oblike γ-enolaze pri polarizaciji mikroglije preverjali še z zaviralcem katepsina X. Z upadom količine izločenega dušikovega oksida smo potrdili, da dodatek zaviralca ovira polarizacijo celic v fenotip M1, hkrati pa smo dokazali, da zaviralec povzroči višjo raven izločane aktivne oblike γ-enolaze iz M1 polarizirane mikroglije. Dobljeni rezultati tako nakazujejo, da bi zaviralci katepsina X lahko imeli potencialno terapevtsko vrednost pri preprečevanju napredovanja nevrodegenerativnih bolezni povezanih z vnetjem, saj zavirajo polarizacijo v vnetni fenotip mikroglije ter hkrati povišajo ravni sinteze aktivne oblike γ-enolaze, ki spodbuja preživetje nevronov.20252025-07-04 08:45:12Magistrsko delo/naloga170366sl