Analiza interakcij med lipidnimi membranami in kondenzati proteina G3BP2 in vitro oziroma stresnimi granulami kot celičnimi analogi kondenzatov na primeru proteina G3BP1Kodra, Ana Marija (Avtor) Župunski, Vera (Mentor) Milovanović, Dragomir (Komentor) ločitev tekočih fazstresne granuleG3BP1/2lipidne membraneV celicah se s procesom ločitve tekočih faz (LLPS) tvorijo številni nemembranski organeli. Mednje uvrščamo stresne granule, ki se v citosolu tvorijo, ko je celica izpostavljena različnim oblikam stresa. Kronična izpostavljenost celic stresu ter posledična deregulacija procesa LLPS vodita v odmiranje živčnih celic in razvoj nevrodegenerativnih bolezni. Ena izmed ključnih komponent stresnih granul je vezavni protein aktivatorja Ras GTPaze 2 (G3BP2), ki ima napram svojemu bolj znanemu paralogu G3BP1 višjo raven izražanja v nevronih. V okviru tega magistrskega dela smo preučevali tvorbo kondenzatov proteina G3BP2 v in vitro sistemu. Osredotočili smo se na to, kako sestava kondenzatov vpliva na njihove fizikalno-kemijske lastnosti ter interakcije z lipidnimi membranami. Kondenzate smo tvorili v prisotnosti molekul RNA ali polietilenglikola. Ugotovili smo, da so kondenzati, ki se tvorijo v prisotnosti polietilenglikola, manjših dimenzij ter imajo večji delež nemobilne frakcije. Lipidne membrane omočijo, vendar stopnja omočenja ni odvisna od naboja membrane. Po drugi strani RNA-kondenzati lipidnih membran ne omočijo. Ker so RNA-kondenzati po sestavi in mehanizmu tvorbe bolj podobni stresnim granulam, smo v celičnih sistemih preverili, kaj omogoča njihovo interakcijo z lipidnimi membranami. Zato smo ugotavljali, ali je znan adapterski protein aneksin A11 (ANXA11) prisoten v stresnih granulah, ki interagirajo s poškodovanimi endolizosomskimi ter lizosomskimi membranami. V ta namen smo uporabili celično linijo FlpIn SH-SY5Y mScarlet I-G3BP1-myc. Potrdili smo, da se ob poškodbi endolizosomskih in lizosomskih membran poveča interakcija med poškodovanimi organeli in stresnimi granulami ter da skoraj 90 % stresnih granul, ki interagirajo z poškodovanimi membranami, vsebuje ANXA11.20252025-07-02 15:15:16Magistrsko delo/naloga170203sl