Optimizacija SEC metode za karakterizacijo svilePiciga, Sara (Avtor) Kralj Cigić, Irena (Mentor) Kraševec, Ida (Komentor) svilafibroinSECoptimizacijaV diplomskem delu sem optimizirala metodo velikostno izključitvene kromatografije (SEC) za določanje proteina fibroina, ki je glavna komponenta svile. Analiza s SEC metodo omogoča vpogled v porazdelitev molskih mas fibroina, kar je pomembno za karakterizacijo svile, ki je pomembna tako za številne sodobne aplikacije svile, na primer v biomedicini, kot tudi za razumevanje razgradnje svile v predmetih kulturne dediščine. Prvi korak diplomskega dela je bila izbira ustreznega topila za redčenje standarda fibroina, ki je bilo hkrati primerno tudi kot mobilna faza za SEC . Preizkusila sem različne pufre in dodatke soli. Kot najustreznejše topilo se je izkazal 0,1 M citratni pufer s pH 4,5 in dodatkom 0,5 M KCl. Sledila je optimizacija SEC metode, ki sem jo najprej izvedla na BSA, nato še na fibroinu. Optimizirala sem detekcijo, kolone, analitske pogoje in mobilno fazo in kot najustreznejša se je izkazala postavitev z eno predkolono in eno kolono ter metodo dolžine 40 minut, s pretokom 0,5 mL/min, volumnom injiciranja 10 μL in valovno dolžino detekcije 280 nm. Za določitev molske mase fibroina sem izvedla umeritev s proteini z znanimi molskimi masami. Ker nisem imela na voljo proteina z dovolj visoko molsko maso, je bila umeritev primerna le za približno oceno molske mase standarda fibroina, ki je znašala 123,5 kDa. Na koncu sem optimizirano metodo uspešno preverila še na dveh realnih vzorcih svile.20252025-06-13 12:15:16Diplomsko delo/naloga169883sl