Mikroskopija STED s tremi barviliBajrić, Amra (Avtor) Urbančič, Iztok (Mentor) Kokot, Boštjan (Komentor) mikroskopija STEDfluorescentna barvilafibroblastiločljivostspektralna dekompozicijaMikroskopija STED predstavlja napreden pristop k fluorescentnemu slikanju, ki omogoča doseganje visoke prostorske ločljivosti. V naši študiji smo preučili učinkovitost mikroskopije STED pri uporabi treh barvil hkrati: ATTO 490LS DPPE, LIVE ORANGE Mito in SiR Actin, s katerimi smo označili različne celične strukture (membrano, mitohondrije in aktinske filamente) v živih fibroblastih, izoliranih iz mišjih pljučnih celic. Raziskali smo, kakšno ločljivost lahko dosežemo s konfokalnim načinom snemanja pri uporabi različnih moči laserja STED. Pri moči laserja STED 98 mW (30 %) smo dosegli ločljivost pod 100 nm za vsa tri barvila, najboljšo pa pri barvilu LIVE ORANGE Mito, ki je znašala približno 76 nm. Pri narejenih eksperimentih smo opazili težave s spektralnim puščanjem signalov enega barvila v spektralna okna drugih barvil. Da bi rešili ta problem, smo uporabili metodologijo spektralne dekompozicije. Ta metoda je omogočila učinkovito ločevanje signalov barvil, kar je bil glavni cilj naše naloge. Signal barvila v napačnem spektralnem oknu se je večinoma zmanjšal z 20 % na manj kot 5 %. Spektralna dekompozicija nam omogoča ločevanje fluorescentnih signalov iz kompleksnih slik, kar pomaga k natančnejši analizi distribucije barvil ter izboljšuje vizualizacijo in interpretacijo celičnih struktur. To tehniko lahko uporabimo pri raziskavah celične dinamike, prepoznavanju patoloških sprememb in oceni učinkovitosti zdravljenja ter pri preučevanju odziva na terapijo. Zaradi svoje natančnosti je pomembna tehnika v biofiziki za razumevanje bioloških procesov in struktur.20252025-04-12 08:15:47Magistrsko delo/naloga168422sl