Optimizacija priprave sferoidov tumorskih celic raka dojke in fibroblastovŠtefin, Blažka (Avtor) Mitrović, Ana (Mentor) Rak3D modelisferoiditumorsko mikrookoljeprotitumorna terapijacisteinski katepsiniRak, kljub napredku v diagnostiki in zdravljenju, ostaja eden največjih zdravstvenih problemov, zato so številne raziskave usmerjene v razumevanje molekulskih mehanizmov raka in iskanje novih terapevtskih možnosti za njegovo zdravljenje. Z napredovanjem razumevanja biologije tumorjev se je pogled na tumorje spremenil, saj jih ne obravnavamo več kot izolirane mase, temveč kot del kompleksnega tumorskega mikrookolja (TMO), ki je postalo ključno pri napredovanju tumorja in pomembno vpliva na nastanek, invazivnost in odpornost na terapijo. Tradicionalni 2D in živalski modeli ne posnemajo ustrezno kompleksnosti tumorjev, zato strmimo k razvoju naprednih 3D celičnih modelov, ki bolje posnemajo TMO in heterogenost človeških tumorjev. V magistrski nalogi smo zato pripravili 3D sferoide so-kultur tumorskih celic raka dojke MCF7 in MDA-MB-231 ter fibroblastov MRC-5. Za pripravo enotnih in ponovljivih sferoidov smo testirali dve različni metodi priprave sferoidov: metodo tekočinskega prekrivanja in metodo viseče kapljice. Ovrednotili smo primernost izbranih celičnih linij za tvorbo 3D sferoidov, potrebo po uporabi ogrodja za njihovo tvorbo, pogoje tvorbe večceličnih sferoidov za posamezen tip celic in njihovo ustreznost za vrednotenje učinka zaviralcev katepsinov. Pokazali smo, da se uporabljene celične linije razlikujejo v svoji sposobnosti tvorbe sferoidov in da lahko s pripravo sferoidov so-kultur izboljšamo tvorbo sferoidov. Na ta način smo pripravili sferoide tudi s celicami MDA-MB-231, ki same ne tvorijo sferoidov. Pri tem smo pokazali, da se pripravljeni sferoidi razlikujejo glede na svoje morfološke lastnosti in da začetno število celic vpliva na velikost pripravljenih sferoidov ter na viabilnost celic v sferoidu. Nadalje smo ugotovili, da lahko tvorbo sferoidov izboljšamo z dodatkom metilceluloze in z uporabo nizko adherentnih plošč pri metodi tekočinskega prekrivanja. V sferoidih so-kultur smo različne populacije celic ločili z uporabo fluorescentnih sond in potrdili, da so se celice MRC-5 združevale v jedru sferoida, tumorske celice pa so se razporedile okrog njih. Za fluorescentne sonde smo predhodno s pretočno citometrijo pokazali, da omogočajo ločevanje populacij celic v so-kulturah tudi po 72 urah. Na koncu smo tudi potrdili, da so pripravljeni sferoidi primeren model za vrednotenje zaviralcev katepsinov, saj je zaviralec katepsina B nitroksolin upočasnil rast sferoidov. V okviru magistrske naloge smo tako pripravili 3D celične modele, ki bolje posnemajo TMO in so primeren model, z uporabo katerega bi lahko izboljšali vrednotenje novih protitumornih terapij.20252025-04-05 08:45:04Magistrsko delo/naloga168251sl