Razvoj in validacija metode za merjenje empagliflozina v krvni plazmi in prilagoditev za mikrovzorčenjeLuštek, Patricia (Avtor) Trontelj, Jurij (Mentor) Vovk, Tomaž (Komentor) empagliflozinvalidacijatekočinska ekstrakcijaLC-MS/MSDBSEmpagliflozin je peroralno zdravilo, ki se uporablja za zniževanje glukoze v krvi pri odraslih bolnikih z neustrezno urejeno sladkorno boleznijo tipa 2 in za zdravljenje bolnikov s srčnim popuščanjem. Načrtuje se farmakokinetična raziskava različnih odmerkov empagliflozina na bolnikih s srčnim popuščanjem. V okviru magistrske naloge smo zato nameravali razviti občutljivo, selektivno, točno in natančno metodo za merjenje koncentracij empagliflozina v krvni plazmi ter postaviti izhodišče za prilagoditev metode na mikrovzorčenje krvi. Preizkusili smo tekočinsko ekstrakcijo ter njeno izboljšano in novejšo različico, podprto tekočinsko ekstrakcijo. V okviru tekočinske ekstrakcije smo preizkusili različnie vrste in volumne organskih topil, pri podprti tekočinski ekstrakciji pa smo preizkusili različne kartuše. Končna metoda, ki smo jo uspešno validirali, temelji na tekočinski ekstrakciji z etil acetatom kot ekstrakcijskim topilom, ki ji sledi detekcija s tekočinsko kromatografijo, sklopljena s tandemsko masno spektrometrijo (LC-MS/MS). Razvito metodo smo ovrednotili v skladu s smernicami ICH M10. Delovno območje analizne metode smo potrdili na koncentracijskem območju med 1 ng/mL in 1000 ng/mL. Izkoristek priprave vzorca je pri nizkem in visokem kontrolnem vzorcu znašal nad 70 %. Večji vpliv ozadja in slabšo ponovljivost smo zaznali le pri najnižjem testiranem kalibracijskem vzorcu pri 0,5 ng/mL. Preverili smo relativni vpliv ozadja, pri čemer je vrednost RSD pri QCL znašala 6,98 % in pri QCH 4,17 %. Potrdili smo ustrezno točnost vseh treh nivojev kontrolnih vzorcev in LLOQ, ki je znašala med 89,2 % in 108,7 %. Prav tako smo pri vseh treh nivojih kontrolnih vzorcev in LLOQ potrdili ustrezno ponovljivost, saj so se vrednosti RSD gibale v območju med 0,45 % ter 12,6 %. Dokazali smo ustrezno dolgoročno stabilnost (vsebnost glede na t = 0 h je po 90 dneh na -20 °C na nivoju QCL znašala 88,3 %, na nivoju QCM 104,7 % in na nivoju QCH 104,6 %) in ustrezno stabilnost v času rokovanja z vzorcem za empagliflozin. Na podlagi rezultatov validacije metode lahko potrdimo, da je metoda ustrezna za določitev koncentracij empagliflozina v plazemskih vzorcih bolnikov na terapiji z empagliflozinom za npr. namen terapevtskega spremljanja koncentracij ali izvedbe farmakokinetičnih študij. Metoda je dobro izhodišče za prilagoditev na mikrovzorčenje, kar smo tudi preverili na manjši seriji posušenih krvnih madežev v območju 5-250 ng/mL.20252025-02-26 08:45:04Magistrsko delo/naloga167520sl