Priprava rekombinantnega proteina RuBisCO aktivaza navadnega repnjakovcaAuer, Špela (Avtor) Taler-Verčič, Ajda (Mentor) RuBisCO aktivazajodiranjemolekulsko kloniranjenikelj afinitetna kromatografijaO vlogi joda v rastlinah je znano zelo malo. Ta v njih prevladuje v obliki jodida (I-), nekaj pa ga je vezanega v organske molekule. Dodajanje joda pri gojenju poveča biomaso rastline in pospeši čas cvetenja. Nekateri proteini v navadnem repnjakovcu (Arabidopsis thaliana) imajo jodirane tirozinske aminokislinske ostanke. Mednje spada tudi RuBisCO aktivaza, ki je kloroplastni encim in ga uvrščamo v skupino katalitičnih šaperonov. Je ATPaza, ki spremeni konformacijo encima RuBisCO tako, da ta preide iz zaprte v odprto konformacijo in pri tem se iz aktivnega mesta sprosti inhibitorska molekula. Namen našega dela je bilo pripraviti in izolirati topen protein RuBisCO aktivaza navadnega repnjakovca v bakterijskem ekspresijskem sistemu. Želeli smo izraziti celotno in skrajšano različico proteina. Skrajšana različica je imela odstranjenih 35 aminokislinskih ostankov iz C-konca. Najprej smo pripravili fagmid s skrajšanim zapisom za RuBisCO aktivazo, potem smo obe različici proteina izrazili in izolirali ter očistili z nikelj afinitetno kromatografijo. Ugotovili smo, da protein RuBisCO aktivaza lahko pripravimo z uporabo bakterijskega ekspresijskega sistema. Vendar nam je uspelo v zadostnih količinah za nadaljnje raziskave izraziti le celoten protein, pri skrajšani različici je bilo proteina zelo malo oziroma ga ni bilo. V prihodnje bi morali optimizirati celoten postopek izražanja skrajšane RuBisCO aktivaze.20252025-01-20 10:50:12Diplomsko delo/naloga166646sl