Imunoterapija z vakcino z bakteriofagi s predstavljenimi tumorskimi peptidi in citokinom interlevkinom 12 za zdravljenje mišjega malignega melanomaBrišar, Nuša (Avtor) Cör, Andrej (Mentor) Bakteriofagitehnologija predstavitve na bakteriofaguimunoterapijamaligni melanominterlevkin 12Uporaba nanotehnoloških pristopov, med njim bakteriofagov s potencialom za genski inženiring, odpira nove možnosti pri razvoju protitumorskih vakcin proti malignemu melanomu. Namen raziskave doktorske naloge je bil pripraviti bakteriofagno vakcino in preveriti njeno protitumorsko učinkovitost na mišjem modelu malignega melanoma. Ovrednotili smo želeli tudi doprinos kombinacije bakteriofagne vakcine in genskega elektroprenosa (GET) plazmida z zapisom za interlevkin 12 (IL-12) k terapevtskemu potencialu. S tehnologijo predstavitve na bakteriofagu smo pripravili gensko spremenjene bakteriofage M13, ki so na površini kapside izražali tumorske peptide MAGE-A1, gp100 ali MART-1/MELAN-A. Izražanje fuzijskih proteinov smo preverili s prenosom western ali LC-MS/MS analizo. Terapevtski potencial vakcinacije z bakteriofagi samostojno ali v kombinaciji z GET IL-12 smo preverili in vivo na miših C57BL z malignim melanomom B16F10. Odziv na terapijo smo dodatno ovrednotili tudi s histološko in imunohistološko analizo. Po potrditvi rekombinantnih fagemidnih vektorjev s Sangerjevim sekvenciranjem in namnožitvi pomožnega filamentoznega bakteriofaga VCSM13 smo uspešno optimizirali proizvodnji proces namnoževanja in čiščenja gensko spremenjenih bakteriofagov M13. Med poskusi in vivo miši niso imele negativnih stranskih učinkov. Dokazali smo, da gensko spremenjeni bakteriofagi aktivirajo celično in humoralno imunost in da bakteriofagna terapija uspešno upočasni rast tumorjev. GET IL-12 doprinese k terapevtskemu učinku gensko spremenjenih bakteriofagov in poveča zaostanek v rasti tumorjev. Terapiji z gensko spremenjeni bakteriofagi in GET IL-12 imata sinergistični učinek in omogočata popolne ozdravitve v 30% primerov. Histološka in imunohistokemična analiza je pokazala, da tako bakteriofagna monoterapija, predvsem pa v kombinaciji z GET IL-12 poveča delež nekroze ter poveča infiltracijo makrofagov, CD4+ in CD8+ limfocitov T v tumorjih. Rezultati doktorske naloge so pokazali, da imajo bakteriofagne vakcine v kombinaciji z GET IL-12 potencial, ki bi ga bilo potrebno raziskati še naprej.20242024-10-03 07:15:18Doktorsko delo/naloga163152sl