Vpliv razgradnje lipidnih kapljic na občutljivost rakavih celic na feroptozoFeguš, Nastja (Avtor) Petan, Toni (Mentor) Župunski, Vera (Komentor) feroptozalipidne kapljicelipolizaadipozna triglicerid lipazaLipidne kapljice (LK) so dinamični celični organeli, prisotni v večini evkariontskih celic. Pomembno vlogo imajo pri regulaciji presnove lipidov, privzemu, razporejanju, shranjevanju in uporabi maščobnih kislin v celicah, pomagajo pri vzdrževanju redoks homeostaze, integritete membran in ščitijo celice pred različnimi vrstami celičnega stresa in pred lipotoksičnostjo. LK se sintetizirajo in razgrajujejo glede na energijske potrebe v celici. Lipoliza in lipofagija sta glavna načina razgrajevanja LK. Adipozna triglicerid lipaza (ATGL) je glavna citosolna hidrolaza, ki katalizira prvo stopnjo lipolize in zagotavlja sproščanje maščobnih kislin iz LK. Feroptoza je oblika celične smrti, ki jo povzroči lipidna peroksidacija. LK vplivajo na celično porazdelitev večkrat nenasičenih maščobnih kislin, ki so potrebne za potek feroptoze. Pomembno vlogo pri tem ima ATGL, saj sprošča maščobne kisline iz LK. Povezave med LK in feroptozo še niso popolnoma jasne. Vlogo lipolize LK pri obrambi celice pred feroptozo smo preučili z novim inhibitorjem človeškega encima ATGL, NG-497. Predpostavili smo, da bo imel inhibitor NG-497 zaščitno vlogo pred feroptozo, saj bi lahko zavrl sproščanje večkrat nenasičenih maščobnih kislin iz LK. Namen magistrskega dela je bil ovrednotiti toksičnost inhibitorja NG-497, preveriti njegov vpliv na razgradnjo LK v različnih pogojih in na občutljivost rakavih celic na feroptozo. Najprej smo s pretočno citometrijo in konfokalno mikroskopijo ovrednotili sposobnost inhibicije lipolize z inhibitorjem NG-497. Ugotovili smo, da inhibitor poveča vsebnost LK v rakavih celicah. Odstotek kolokalizacije med lizosomi in LK se je povečal ob inhibiciji encima lizosomske kisle lipaze, medtem ko hkratna inhibicija encimov ATGL in lizosomske kisle lipaze ne spremeni omenjenega učinka, ki ga opazimo ob inhibiciji le lizosomske kisle lipaze. V različnih eksperimentalnih pogojih smo preverili vpliv inhibitorja NG-497 na občutljivost celic na feroptozo, ki smo jo sprožili s spojino RSL3 (za RAS-selektivna letalna mala molekula 3). V nasprotju s pričakovanji smo ugotovili, da inhibitor NG-497 nima vpliva na občutljivost celic na feroptozo, torej nima zaščitnega učinka. Naši rezultati bodo prispevali k razumevanju povezav med LK in feroptozo.20242024-09-27 11:15:03Magistrsko delo/naloga162809sl