Primerjava klasičnih in visokopretočnih načinov transfekcije in selekcije stabilnih produkcijskih kultur CHOPetrushevikj, Tamara (Avtor) Narat, Mojca (Mentor) Kramer, Lovro (Komentor) Celične linijesesalske celiceCHOtransfekcijevisokopretočnoselekcijaBiofarmacevtska industrija teži k večji učinkovitosti pri proizvodnji bioloških zdravil z uporabo večjega števila klonov v krajših časovnicah razvoja, kar omogoča boljše produkcijske celične linije in večji izkoristek proizvodnje. Do sedaj uporabljane rastne plastenke (SF) nadomeščajo plošče s 24 globokimi vdolbinicami (24DW) ter plošče s 96 globokimi vdolbinicami (96DW). Namen magistrske naloge je ovrednotiti vpliv različnih platform transfekcij (klasična - LT ter visoko zmogljiva 96W platforma - HT) na rastne razmere celic CHO in na titer rekombinantnih protiteles, ter ovrednotiti tehnologijo HT za selekcijo stabilno transficiranih CHO celic v gojitvenih platformah 24DW in 96DW. Uspešnost izražanja vstavljenih genov, ki vplivajo na glikozilacijo protitelesa smo ovrednotili z analizo mRNA. Pri primerjavi viabilnosti v točki selekcijske krize v 24DW in 96DW, smo dobili naslednje vrednosti p: < 0,0001 (celična linija 1), 0,1365 (celična linija 2) in 0,0002 (celična linija 3). Selekcija je bila bolj stresna za celice v 96DW v primerjavi z 24DW. Z HT transfekcijsko metodo smo pri celični liniji 1 in 2 dosegli večjo variabilnost viabilnosti. Pri celični liniji 3 smo dobili primerljivi povprečji viabilnosti (p = 0,6916) med LT in HT. V šarži z dohranjevanjem smo dobili primerljive titre na dan 7 in delno primerljive titre na dan 14 med 24DW in 96DW ter LT in HT. Pri vsaki platformi smo dosegli zelo primerljive maksimalne titre. Najvišjo specifično produktivnost smo dobili pri 96DW HT. Dokazali smo, da so dodatni geni za uravnavanje glikozilacije (GE geni) lahko razlog za nižje titre in celično gostoto (VCD). Različni načini transfekcije ne vplivajo na izražanje teh genov (gen A, p = 0,1425; gen B, p = 0,0777), medtem ko smo pri 96DW dobili nižje izražanje GE genov v primerjavi s 24DW (gen A, p < 0,0001; gen B, p < 0,0001).20242024-09-19 08:16:23Magistrsko delo/naloga162144sl