Vpliv oznake FLAG na fazno separacijo tekoče-tekočeKoren, Žiga (Avtor) Hadži, San (Mentor) fazna separacija tekoče-tekočeoznaka FLAGFPLCUV-VisIVAFazna separacija tekoče-tekoče (LLPS) je fizikalno-kemijski pojav, pri katerem se raztopina razdeli v dve tekoči fazi, ena z višjo in druga z nižjo koncentracijo topljenca. V diplomskem delu smo raziskovali, kako pri modelnem proteinu nanotelesu 55 (Nb55) prisotnost oznake FLAG z različnim številom ponovitev vpliva na LLPS v odvisnosti od temperature, koncentracije soli, koncentracije proteina in koncentracije polietilen glikola. V ta namen smo z uporabo kloniranja s sestavljanjem in vivo pripravili DNA konstrukte, ki so nosili zapis za nanotelo z 0x (brez oznake), 1x, 2x in 3x oznako FLAG. Pojav LLPS smo spremljali z UV-Vis spektroskopijo ob hlajenju s hitrostjo 0,1 °C/min. Ugotovili smo, da do pojava LLPS pride pri temperaturah med 15 do 5 °C, če ima protein zadostno število ponovitev oznake FLAG. Potrdili smo povezavo med koncentracijo proteina in med nastankom LLPS, saj je do pojava pri vzorcih z višjimi koncentracijami prišlo že pri višjih temperaturah (okoli 15 °C), kot pri tistih z nižjimi koncentracijami (okoli 5 °C). Potrdili smo tudi zvezo med številom ponovitev oznake FLAG in nagnjenostjo k nastanku LLPS, saj sta proteina z 2x in 3x oznako FLAG edina pri katerih smo zaznali LLPS v preiskovanem koncentracijskem območju. Dodatek soli ali polietilen glikola na pojav LLPS deluje zaviralno.20242024-09-10 10:45:00Diplomsko delo/naloga161361sl