Molekulsko kloniranje, izražanje in izolacija človeškega proteina FHL1Vidmar, Nik (Avtor) Gaber, Aljaž (Mentor) FHL1transkripcijski faktorsrčno-žilne bolezniFHL1 (angl. Four and a half LIM domains protein 1) je protein, ki ga gradijo štiri in pol domene LIM. Domeno LIM gradita 2 zaporedna motiva cinkovih prstov, ki ju koordinirata dva iona Zn$^{2+}$, vsak ion po en motiv. Proteini FHL1 sodelujejo pri interakcijah z receptorji, transkripcijskimi proteini, proteini signalnih poti in strukturnimi proteini. FHL1 sodeluje kot transkripcijski faktor in sporočevalna molekula v veliko signalnih poteh, kar je razlog, da je vključen v veliko bolezenskih stanj. Med najbolj zaskrbljujoča spadajo srčno-žilne bolezni, kar je bil v zadnjih letih povod za povečano raziskovanje FHL1 in interakcij z drugimi proteini, saj so te slabo poznane. Cilj našega diplomskega dela je bil ugotoviti, če lahko po isti metodi kot za soroden protein FHL2 izrazimo in očistimo FHL1 ter tako pripravimo aktivno obliko tega proteina, kar bi lahko uporabili pri nadaljevanju analiz interakcij FHL1 z drugimi proteini. Zapis za FHL1 smo vnesli v vektor pET-32b(+), ki je vseboval vključek His6-sfGFP-TEV-2 × GSS-BamHI, z metodo IVA. Sledilo je izražanje celotnega vključka ter čiščenje FHL1, ki je potekalo z uporabo nikljeve afinitetne kromatografije. Med čiščenjem smo sfGFP in heksahistidinsko oznako odcepili s proteazo TEV. Rezultati analize z NaDS-PAGE po čiščenju so pokazali, da postopek čiščenja ni bil optimalen, saj smo pred dializo verjetno dodali premalo proteaze TEV in zato ni prišlo do odcepitve FHL1 od His6 in sfGFP. FHL1 je bil dobro topen. Nismo imeli težav z agregacijo proteinov. Za večji uspeh pri čiščenju bi bilo vredno poskusiti dodatek večjih količin proteaze TEV med dializo.20242024-09-09 12:00:01Diplomsko delo/naloga161294sl