Kloniranje in priprava delecijskih mutantov proteina TDP-43 v bakterijah Escherichia coliLah, Urša (Avtor) Rogelj, Boris (Mentor) TDP-43amiotrofična lateralna sklerozamolekulsko kloniranjeizražanje proteinaTDP-43 oz. protein z molekulsko maso 43 kDa, ki veže transaktivacijski odzivni element molekule DNA je predstavnik družine heterogenih jedrnih ribonukleoproteinov (hnRNP). TDP-43 je RNA- in DNA-vezavni protein, ki se v fizioloških pogojih pretežno nahaja v jedru. Tam sodeluje pri uravnavanju transkripcije in metabolizma RNA ter številnih drugih procesih, med katerimi so nadzorovanje izražanja genov, procesiranje miRNA, apoptoza, delitev celic in tvorba stresnih granul. Sestavljen je iz N-končne domene, dveh RNA-prepoznavnih motivov (RRM1 in RRM2) in C-končne domene. Poleg tega vsebuje tudi jedrni lokalizacijski signal in signal za transport iz jedra, ki omogočata premikanje TDP-43 med jedrom in citoplazmo. Kopičenje agregatov proteina TDP-43 in napačna lokalizacija so pogosti patološki znaki pri bolnikih z amiotrofično lateralno sklerozo (ALS) in frontotemporalno demenco (FTD). V diplomskem delu smo po metodi IVA-kloniranja ustvarili delecijske mutante proteina TDP-43, ki smo jih nato z avtoindukcijo uspešno izrazili v bakterijskih celicah Escherichia coli BL21[DE3]. Izražanje proteinov smo na koncu preverili z NaDS-PAGE in prenosom western.20242024-09-09 10:14:07Diplomsko delo/naloga161274sl