Heterologno izražanje genov vključenih v biosintezo večkrat nenasičenih maščobnih kislin v bakteriji Streptomyces rimosusGašpirc, Kristjan (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Polak, Tomaž (Komentor) StreptomycesStreptomyces rimosusheterologno izražanjevečkrat nenasičene maščobne kislineoptimizacija gojiščaBakterije iz rodu Streptomyces so znane po sintezi različnih sekundarnih metabolitov. Zaradi razvitih številnih genskih orodij se vrste iz rodu Streptomyces postavljajo kot odlični gostitelji za proizvodnjo heterolognih sekundarnih metabolitov. Namen te raziskave je bil vstaviti dva različna plazmidna vektorja v gensko spremenjen sev Streptomyces rimosus, ki vsebuje 145 kbp veliko delecijo, ki nosi zapis dveh glavnih sekundarnih metabolitov, oksitetraciklina in rimocidina, zaradi česar ta sev predstavlja odličenega gostitelja za proizvodnjo heterolognih produktov. Večkrat nenasičene maščobne kisline (PUFA) igrajo ključno vlogo v različnih fizioloških in parafizioloških procesih v človeškem telesu. Med njimi izstopajo omega-3 maščobne kisline, kot sta eikozapentaenojska kislina (EPA) in dokozaheksaenojska kislina (DHA). Te kisline so povezane s preprečevanjem in zdravljenjem bolezni srca in ožilja, debelosti in diabetesa. V študiji smo uporabili biosintezno gensko gručo za sintezo večkrat nenasičenih maščobnih kislin, ki je sestavljena iz treh genov: pfa1, pfa2 in pfa3. Ti geni izvirajo iz miksobakterije Aetherobacter fasciculatus. Biosintezna genska gruča kodira multifunkcionalni encim, ki katalizira biosintezo nenasičenih maščobnih kislin, kot sta EPA in DHA. Uporabljena sta bila dva plazmidna vektorja, pAB04ErmE*PUFA in pAB04ErmE*PUFA-ppt. Oba vektorja vsebujeta gensko gručo miksobakterije A. fasciculatus, odgovorno za sintezo PUFA. Poleg tega plazmid pAB04ErmE*PUFA-ppt vsebuje tudi gen za fosfopanteteinil transferazo, ki naj bi povečala sintezo PUFA. Vektorji so bili sestavljeni in preneseni v bakterijo S. rimosus OTC 145. Sevi S. rimosus ki vsebujejo vse tri gene pfa1, pfa2 in pfa3, so proizvajali DHA. Koncentracija DHA je bila 1-4 mg/L. Z ustrezno optimizacijo gojišča, s spreminjanjem koncentracij virov ogljika, dušika, fosforja in rastlinskega olja, je bil dosežen titer DHA 21,03 mg/L, kar predstavlja 17-kratno povečanje glede na osnovno produkcijsko gojišče GOTC-P.[K. Gašpirc]20242024-09-08 07:17:47Magistrsko delo/naloga161198sl