Priprava izbranih derivatov enaminona za detekcijo proteinskih agregatovPriveršek, Maj (Avtor) Košmrlj, Janez (Mentor) proteinski agregatiamiotrofična lateralna sklerozafluorescenčne molekulske sondeenaminonNastanek proteinskih agregatov znotraj celic lahko vodi do mnogih patoloških stanj, kot so Alzheimerjeva, Parkinsonova in Huntingtonova bolezen, amiotrofična lateralna skleroza (ALS), demenca Lewijevih telesc in frontotemporalna demenca. Ker se proteinski agregati pri zgoraj naštetih boleznih pojavljajo tudi leta pred simptomi, ponujajo možnost zgodnjega odkrivanja bolezni in njenega zdravljenja. Za detekcijo teh agregatov se lahko uporabljajo tudi fluorescenčne molekulske sonde na osnovi "push-pull" elektronskih sistemov. S tem namenom smo sintetizirali tri fluorescenčne molekulske sonde z enaminonskim fragmentom. Enaminon smo sintetizirali preko reakcije enolne oblike acetilne skupine z N,N-dimetilformamid dietil acetalom oziroma N,N-dimetilformamid dimetil acetalom. Vse tri sinteze so bile uspešno izvedene in spojine so bile okarakterizirane z 1H in 13C NMR ter IR spektroskopijo, masno spektrometrijo visoke ločljivosti (HRMS) in meritvijo temperature tališča. Čistost spojin smo preverili s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti (HPLC). Spojinam smo tudi pomerili optične lastnosti, kot sta absorpcija, emisija in ekscitacija. Sledila je izvedba testov detekcije proteinskih agregatov. Kot eksperimentalni model smo uporabili protein TDP-43, katerega agregati so značilni za bolnike z ALS. Naš protein TDP-43 je imel na C-koncu fuzijskega partnerja vezavni protein za maltozo (MBP), ki je povečal topnost proteina in nam omogočal induciranje agregacije z dodatkom proteaze virusa jedkanja tobaka (TEV). Pokazali smo, da vse tri fluorescenčne sonde uspešno razlikujejo med agregirano in neagregirano obliko TDP-43.20242024-07-02 12:16:58Diplomsko delo/naloga159172sl