Kloniranje in izražanje kloroplastnih proteinov Navadnega repnjakovca v bakterijskem ekspresijskem sistemuWeingerl, Zarja (Avtor) Taler-Verčič, Ajda (Mentor) jodiranjeRuBisCO aktivazaAtFBA2molekulsko kloniranjeJod igra pomembno vlogo v številnih organizmih. Je esencialno mikro-hranilo za ljudi in živali, njegova vloga v rastlinah pa je do danes še dokaj neraziskana. Njegovo pomankanje pri ljudeh lahko povzroča številne zdravstvene težave, zato si znanstveniki prizadevajo najti način, kako bi lahko zagotovili zadosten vnos joda v telo. Zelo potencialna je biofortifikacija pridelkov, vendar je za njeno učinkovito delovanje ključnega pomena razumevanje vloge joda v rastlinah. Ena izmed neznank so tudi jodirani proteini, ki so jih znanstveniki identificirali v listih in koreninah rastline A. thaliana (Navadni repnjakovec). Mednje sodita proteina ribuloza bisfosfat karboksilaza/oksigenaza aktivaza (RuBisCO aktivaza) in fruktoza-bisfosfat aldolaza 2 (AtFBA2), ki igrata pomembno vlogo v Calvinovem ciklu in sta ključna za različne fotosintetske organizme. Z željo po odkritju vloge joda v RuBisCO aktivazi in AtFBA2 smo se lotili molekulskega kloniranja in priprave rekombinantnih proteinov RuBisCO aktivaza in AtFBA2. Uspeli smo pripraviti zapisa za oba izbrana proteina, jima dodali N-končno heksahistidinsko oznako in prepoznavno mesto za TEV proteazo, ter ju prenesli v vektor pET-32b(+). Uspešno smo izvedli transformacijo celic E. coli seva DH5α, čemur je sledila izolacija plazmida in njegova vstavitev v ekspresijski sev. Izražanje in izolacijo obeh proteinov z Ni-afinitetno kromatografijo smo analizirali z NaDS PAGE.. Pri izražanju žal nismo bili uspešni, zato nismo mogli nadaljevati z preučevanjem funkcije joda v izbranih proteinih. Postopek, ki smo ga uporabili bo tako potrebno še nadalje optimizirati.20242024-06-18 10:55:01Diplomsko delo/naloga158637sl