Vpliv genetske variabilnosti in izražanja specifičnih mikroRNA na koncentracije PCSK9 med zdravljenjem z zaviralci PCSK9Karun, Tina (Avtor) Trebušak Podkrajšek, Katarina (Mentor) Šebeštjen, Miran (Komentor) Protein proproteinske konvertaze subtilizin/keksin tipa 9mikroRNAgenetski polimorfizemgenotipizacijakvantitativni PCR.Protein proproteinske konvertaze subtilizin/keksin tipa 9 (PCSK9) pomembno posega v proces uravnavanja koncentracije holesterola LDL preko delovanja na receptorje za holesterol LDL na površini hepatocitov. PCSK9 se namreč veže na receptorje za holesterol LDL in celoten kompleks se razgradi v lizosomih in endosomih, zaradi česar na površini hepatocitov primanjkuje receptorjev za holesterol LDL in koncentracija holesterola LDL v krvi ostaja visoka. Medtem ko sta mehanizem delovanja PCSK9 in njegova vloga v celotnem procesu uravnavanja koncentracije holesterola LDL že dodobra proučena, pa njegovo uravnavanje s strani različnih dejavnikov še ni povsem raziskano. V sklopu magistrske naloge smo zato proučevali vpliv variabilnosti gena PCSK9 ter izražanja specifičnih mikroRNA na koncentracije PCSK9 pri bolnikih med zdravljenjem z zaviralci PCSK9, ki so preboleli zgodnji miokardni infarkt in imajo povišane koncentracije lipoproteina (a). Poleg 68 bolnikov smo v raziskavo vključili še 16 zdravih preiskovancev. Bolnike smo randomizirali v dve skupini. Prva skupina (N = 40) je šest mesecev prejemala zaviralec PCSK9, druga skupina (N = 28) pa šest mesecev placebo in nato šest mesecev zaviralec PCSK9. Bolnikom in zdravim preiskovancem smo določili ravni izbranih miRNA s kvantitativnim PCR ter genotipizirali izbrane genetske spremembe v genu PCSK9 s sondami TaqMan. Poleg tega smo v serumskih vzorcih določili koncentracije celotnega PCSK9 z encimsko imunoadsorpcijsko metodo. Pridobljeni rezultati potrjujejo vpletenost miR-483-5p v proces uravnavanja PCSK9 in vivo, saj smo z linearnim regresijskim modelom odkrili statistično značilen vpliv miR-483-5p na koncentracije PCSK9 pri bolnikih ob vključitvi v raziskavo. Pri preostalih proučevanih miRNA (miR-191-5p, miR-224-5p in miR-337-3p) vpliva na koncentracije PCSK9 nismo odkrili, kljub temu da obstajajo statistično značilne razlike v njihovem izražanju med bolniki in zdravimi preiskovanci ob vključitvi v raziskavo ter pri bolnikih med obdobjem zdravljenja z zaviralci PCSK9. Prav tako nismo odkrili vpliva proučevanih genetskih polimorfizmov na koncentracije PCSK9 pri bolnikih, kar je v nasprotju s številnimi do sedaj opravljenimi raziskavami. Razlogov za to je lahko več, bistvena pa sta predhodno zdravljenje s statini in prejemanje zaviralcev PCSK9. Omenjena zdravila namreč pomembno vplivajo na koncentracije analiziranega PCSK9, kar otežuje natančno oceno genetskega vpliva.20242024-06-14 08:45:31Magistrsko delo/naloga158483sl