Primerjava komercialno dostopnih kompletov reagentov za tarčno osamitev celic glede na prisotnost antigena CD3Popelar, Ožbej Jakob (Avtor) Narat, Mojca (Mentor) Primon, Monika (Komentor) celično ločevanjeCD3celica TlevkaferezaV biomedicinskih raziskavah in diagnostični medicini, v zadnjem času pa tudi pri postopkih celičnih terapij, je ločevanje celic ključnega pomena. Postopek omogoča izolacijo specifičnih celičnih populacij, kot so celice s specifičnim antigenom, iz mešanice različnih celic. Eden od takih antigenov oz. celičnih označevalcev je molekula CD3. V zadnjih dveh desetletjih je ta proces doživel izjemen razvoj, pri čemer so se razvile različne metode za izolacijo določenih tipov celic. V naši študiji smo se osredotočili za analizo in primerjavo treh metod celičnega ločevanja: PluriBead®, Dynabeads in Strep-tag®. Metodi PluriBead® in Strep-tag® smo najprej uporabili za ločevanje CD3+ (Jurkat) in CD3- (Kasumi-1) celičnih linij. Z vsemi tremi metodami pa smo ločevali primarne celice iz periferne krvi, pridobljene s postopkom levkafereze. Cilj je bil oceniti učinkovitost, specifičnost in ekonomsko upravičenost vseh treh metod za ločevanje ciljnih celičnih populacij. Pri tem smo se osredotočili na ločevanje celic s protitelesom proti CD3. Strep-tag® metoda je dosegla visok izkoristek pri CD3+ celični liniji Jurkat, medtem ko je PluriBead® dosegel nižji izkoristek, kar kaže na večjo učinkovitost metode Strep-tag® pri ločevanju teh celic. Pri CD3- celični liniji Kasumi-1 sta oba sistema (Strep-tag® in PluriBead®) dosegla enako nizek rezultat izolacije, kar je bilo pričakovano, saj celice Kasumi-1 ne izražajo antigena CD3 v veliki meri. To pomeni, da je bilo ločevanje ustrezno negativno. Dynabeads so se izkazali kot učinkovit kompromis pri ločevanju levkocitnega koncentrata, saj smo s to metodo dosegli srednji izkoristek z visoko čistostjo in sprejemljivo viabilnostjo. Vendar sta bili metodi Strep-tag® in PluriBead® boljši v določenih karakteristikah. S Strep-tag® smo dosegli večji izkoristek ob podobni čistosti, s PluriBead® pa boljšo viabilnost, kljub slabšemu izkoristku. Ekonomska ocena je pokazala, da je za metodo Dynabeads potrebna najvišja začetna investicija, metoda PluriBead® ima najnižje ponavljajoče se stroške, metoda Strep-tag® pa sicer ne potrebuje začetne investicije, a ima visoke ponavljajoče se stroške. Naše ugotovitve nudijo pomemben vpogled v metode ločevanja celic. Čeprav prinaša vsaka metoda svoje edinstvene prednosti, je njihova izbira odvisna od specifičnih potreb in omejitev projekta.20242024-06-01 07:16:09Magistrsko delo/naloga158269sl